2) нейтральный раствор формалина (+)
3) глицерин
4) ацетон
Нейтральный раствор формалина является стандартным фиксатором для большинства морфологических исследований нервной ткани. Обычно применяется 10% нейтральный забуференный формалин, содержащий около 4% формальдегида. Формальдегид образует поперечные связи между белковыми молекулами, стабилизируя клеточные структуры, миелиновые оболочки, нейропиль, сосудистые стенки и межклеточное вещество. Одновременно прекращаются аутолитические процессы и существенно замедляется посмертное разрушение ткани.
После фиксации материал может быть подвергнут проводке, заливке в парафин и приготовлению срезов для окрашивания гематоксилином и эозином, по Нисслю, рядом серебрильных методов и другими специальными методиками. Качество фиксации особенно важно для оценки нейронов, глии, аксонов и миелина: недостаточная фиксация вызывает деформацию и аутолиз, а чрезмерно длительная может ухудшать проникновение красителей и изменять антигенные свойства тканей. Поэтому нейтральный формалин обеспечивает оптимальное сочетание сохранности структуры и пригодности материала для последующего исследования.
Этанол и ацетон относятся преимущественно к коагулирующим и дегидратирующим реагентам; они могут вызывать сморщивание ткани, экстракцию липидов и нарушение тонких морфологических деталей. Глицерин фиксацией не является: его используют главным образом как среду для временного хранения, просветления или заключения отдельных препаратов. Выбор специальных фиксирующих смесей может зависеть от конкретной окраски, однако для стандартной фиксации нервной ткани правильным является нейтральный формалин.
| Реагент | Основное действие | Влияние на нервную ткань | Типичное применение |
|---|---|---|---|
| Нейтральный забуференный формалин | Химическая фиксация за счёт образования поперечных связей белков | Хорошо сохраняет нейроны, глию, сосуды, нейропиль и общую архитектонику | Рутинная гистология и большинство специальных морфологических окрасок |
| Этанол 96% | Коагуляция белков и быстрое обезвоживание | Может вызывать сморщивание, уплотнение ткани и экстракцию липидов | Отдельные цитологические и специальные методики, но не универсальная фиксация мозга |
| Ацетон | Сильное обезвоживание, коагуляция белков, растворение липидов | Способен существенно изменить миелин и тонкую структуру нервной ткани | Специальные лабораторные протоколы, включая отдельные иммуногистохимические методы |
| Глицерин | Осмотическая защита, просветление и предотвращение высыхания | Не прекращает аутолиз и не обеспечивает полноценную фиксацию клеточных структур | Временное хранение, просветление и заключение препаратов |
| Недостаточная фиксация | Неполное прекращение аутолиза | Разрушение нейронов, нечёткие контуры клеток, артефакты окрашивания | Признак нарушения этапа подготовки материала |
| Избыточная фиксация формалином | Чрезмерная стабилизация и маскирование тканевых компонентов | Снижение интенсивности некоторых окрасок и доступности антигенов | Требует соблюдения регламента времени фиксации и объёма фиксирующей жидкости |
Фиксирующий раствор должен полностью покрывать образец; оптимальным считается значительное превышение объёма формалина над объёмом ткани. Крупные фрагменты нервной ткани перед фиксацией разрезают, чтобы обеспечить равномерное проникновение реагента. Для иммуногистохимии и отдельных ферментных или электронно-микроскопических исследований могут применяться иные протоколы, но это не отменяет роли нейтрального формалина как базового фиксирующего средства.