2) спектрофотометрии (+)
3) газожидкостной хроматографии
4) колориметрии
Качественное выявление карбоксигемоглобина (HbCO) основано на его характерных спектральных свойствах. При прохождении света через гемолизированную кровь HbCO поглощает излучение в видимой области спектра иначе, чем оксигемоглобин и восстановленный гемоглобин; оценивают наличие специфических полос поглощения и их изменения после воздействия восстановителя. В отличие от оксигемоглобина, карбоксигемоглобин сохраняет характерный спектр при восстановлении, что позволяет подтвердить присутствие соединения.
Спектрофотометрия регистрирует оптическую плотность образца на заданных длинах волн и может использоваться как для качественной идентификации HbCO по спектральному профилю, так и для последующего количественного определения его доли. Метод имеет принципиальное значение при судебно-медицинской диагностике отравления оксидом углерода, поскольку концентрация HbCO в крови отражает степень блокады гемоглобина и нарушения транспорта кислорода. Иммуногистохимия предназначена преимущественно для выявления антигенов в тканях, газожидкостная хроматография — для анализа летучих и термостабильных веществ, а простая колориметрия недостаточно специфична для уверенной идентификации HbCO.
| Метод или признак | Основной принцип | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Спектрофотометрия | Регистрация поглощения света HbCO на характерных длинах волн | Основной метод качественного выявления; возможна количественная оценка карбоксигемоглобина |
| Восстановительная проба | Сравнение спектра крови до и после добавления восстановителя | Сохранение характерного спектра поддерживает наличие HbCO |
| Газожидкостная хроматография | Разделение и детекция летучих химических соединений | Не является стандартным методом определения интактного карбоксигемоглобина в крови |
| Иммуногистохимия | Выявление антигенов с помощью специфических антител в тканевых срезах | Для рутинной идентификации HbCO в крови не применяется |
| Колориметрия | Оценка интенсивности окраски раствора | Может быть менее специфичной и не отражает полный спектральный профиль гемоглобиновых производных |
| Количественная оценка HbCO | Расчёт доли HbCO по оптической плотности на нескольких длинах волн | Используется для определения степени воздействия оксида углерода и интерпретации тяжести отравления |
Оксид углерода связывается с гемоглобином с образованием HbCO, причём сродство гемоглобина к нему значительно выше, чем к кислороду. Это приводит не только к уменьшению количества доступного гемоглобина, но и к смещению кривой диссоциации оксигемоглобина влево, поэтому ткани испытывают гипоксию. Результаты исследования необходимо сопоставлять с обстоятельствами обнаружения, клиническими проявлениями и посмертными изменениями, поскольку содержание HbCO может снижаться при пребывании трупа на воздухе или после восстановительных мероприятий.