2) газохроматографическим
3) колориметрическим
4) флюориметрическим
Качественное выявление опиатов в биологическом материале на этапе скрининга проводят иммуноферментным методом, включая варианты ELISA и EMIT. Его основа — специфическое взаимодействие антител с антигенными детерминантами опиатов или их метаболитов. В конкурентных тест-системах компоненты образца соперничают с меченым антигеном за связывание с антителами, а возникающий ферментативный сигнал регистрируется по изменению окраски; его интенсивность обратно связана с концентрацией определяемого вещества.
Метод позволяет быстро исследовать мочу, кровь и другие биологические объекты и установить наличие соединений опиатной группы выше заданного порогового уровня. Результат обычно имеет качественный или полуколичественный характер и интерпретируется с учетом калибратора и диагностического cut-off. Антитела могут реагировать не только с морфином, но и с кодеином, 6-моноацетилморфином и другими структурно родственными веществами, поэтому положительный скрининговый результат не всегда идентифицирует конкретный опиат.
Газохроматографический, особенно газохроматографический масс-спектрометрический, анализ обладает высокой специфичностью и применяется для подтверждения предварительного иммунологического результата и точной идентификации вещества. Колориметрические и флюориметрические реакции могут использоваться как дополнительные химико-аналитические подходы, но обычно уступают иммуноферментному тестированию по скорости, стандартизации и пригодности для массового скрининга.
| Метод | Основной принцип | Типичный этап исследования | Диагностические особенности |
|---|---|---|---|
| Иммуноферментный | Специфическое связывание антител с опиатом или его метаболитом с ферментной регистрацией реакции | Первичный скрининг | Быстрый, чувствительный, позволяет выявить класс опиатов выше порогового значения |
| Газохроматографический | Разделение летучих или дериватизированных компонентов по времени удерживания | Подтверждающий анализ | Высокая аналитическая специфичность, требует пробоподготовки и нередко дериватизации |
| Газовая хроматография — масс-спектрометрия | Хроматографическое разделение с последующей идентификацией по масс-спектру | Подтверждение и идентификация конкретного вещества | Позволяет различать близкие соединения и подтверждать наличие опиата в судебно-медицинском исследовании |
| Колориметрический | Образование окрашенного продукта химической реакции с исследуемым веществом | Дополнительное или ориентировочное исследование | Прост, но менее специфичен; возможны реакции с посторонними соединениями биоматериала |
| Флюориметрический | Измерение интенсивности флуоресценции аналита или продукта его реакции | Специализированный аналитический метод | Высокая чувствительность при подходящей реакции, но ограниченная специфичность и необходимость аппаратуры |
| Иммунохроматографический экспресс-тест | Миграция комплекса антиген–антитело по мембране с визуальной или инструментальной регистрацией | Быстрый предварительный контроль | Удобен вне лаборатории, однако положительный результат также требует подтверждения инструментальным методом |
Иммуноферментный анализ является методом выбора для первичного качественного скрининга опиатов благодаря сочетанию скорости, чувствительности и возможности одновременного исследования большого числа образцов. При интерпретации необходимо учитывать перекрестную реактивность антител, прием лекарственных препаратов и установленный порог тест-системы. В судебно-медицинской практике положительный скрининг рассматривают как предварительный результат. Окончательное заключение о конкретном веществе и его концентрации основывают на подтверждающем хроматографическом исследовании, предпочтительно с масс-спектрометрической детекцией.