2) перегонкой с водяным паром из подкисленного объекта
3) алкилнитритным методом (методом дериватизации) (+)
4) азеотропной перегонкой
Алкилнитритная пробоподготовка основана на химической дериватизации спиртов: в герметично закрытом флаконе нитрит натрия в присутствии трихлоруксусной кислоты образует азотистую кислоту, которая взаимодействует с этанолом с образованием этилнитрита — летучего эфира азотистой кислоты. Полученный дериват значительно легче переходит в равновесную парогазовую фазу, откуда его отбирают шприцем и вводят в газовый хроматограф. Далее этилнитрит разделяется с другими летучими компонентами по времени удерживания и регистрируется детектором.
Количественное определение обычно выполняют методом внутреннего стандарта: к образцу добавляют известное количество пропанола-1, который в тех же условиях превращается в пропилнитрит. Расчет по отношению площадей пиков этилнитрита и пропилнитрита уменьшает влияние вариаций объема паровой фазы, техники ввода и условий дериватизации. Экстракция диэтиловым эфиром недостаточно селективна для хорошо растворимого в воде этанола, а перегонка усложняет анализ и повышает риск потерь летучего вещества; поэтому эти способы не соответствуют принципу классической стандартизованной газохроматографической методики определения алкоголя в крови, моче и слюне.
| Критерий | Алкилнитритный метод | Экстракция диэтиловым эфиром | Перегонные методы |
|---|---|---|---|
| Принцип пробоподготовки | Химическое превращение этанола в летучий этилнитрит | Распределение этанола между водной и органической фазами | Выделение вещества за счет испарения и последующей конденсации |
| Форма вещества, поступающая в хроматограф | Парогазовая фаза, содержащая алкилнитриты | Органический экстракт с растворителем и сопутствующими компонентами | Жидкий дистиллят, требующий дополнительного дозирования |
| Пригодность для водных биоматриц | Высокая: кровь, моча и слюна исследуются в герметичном флаконе | Ограниченная из-за высокого сродства этанола к водной фазе | Возможна, но метод трудоемок и не является оптимальной рутинной подготовкой |
| Риск потери этанола | Минимизируется немедленной герметизацией и анализом паровой фазы | Возможны потери при разделении фаз и испарении растворителя | Возможны потери при нагревании, переносе и неполной конденсации |
| Количественный контроль | Используется внутренний стандарт, обычно пропанол-1 | Требуется учет коэффициента экстракции и восстановления | Требуется контроль полноты отгонки и конечного объема дистиллята |
| Аналитическая специфичность | Спирты образуют соответствующие дериваты с различным временем удерживания | В экстракт могут переходить другие органические вещества биоматрицы | Вместе с этанолом могут отгоняться другие летучие соединения |
| Значение для тестового задания | Соответствует классической методике дериватизационной газовой хроматографии этанола | Не является регламентированной подготовкой в рассматриваемом методе | Предназначены для иных аналитических задач и не обеспечивают преимуществ дериватизации |
При работе с алкилнитритной методикой флакон должен быть герметично закрыт, поскольку этилнитрит обладает высокой летучестью. Перед серией измерений исследуют фоновую и контрольную пробы, а результат подтверждают параллельными определениями. Наличие н-пропанола в исследуемом материале может препятствовать применению стандартной схемы, если это соединение используется как внутренний стандарт. В современных лабораториях также применяется прямой автоматизированный парофазный анализ без дериватизации, однако он представляет собой самостоятельную методику и не изменяет правильный ответ в данном задании.