2) избегать перемещения оборудования или реагентов в разные зоны лаборатории
3) то, что необходимо использование наконечников с фильтрами для автоматических дозаторов
4) то, что перемещение персонала в разные зоны на короткое время может осуществляться без смены лабораторного халата (+)
Неверным является утверждение о возможности кратковременного перемещения персонала между зонами без смены лабораторного халата. Халат, как и перчатки, может стать механическим переносчиком клеточного материала, выделенной ДНК или ампликонов — продуктов ПЦР, содержащих большое количество копий целевой последовательности. Даже микроскопическое количество ампликона, попавшее в зону экстракции или приготовления реакционной смеси, способно привести к ложноположительному результату.
Молекулярно-генетическую лабораторию организуют по принципу однонаправленного потока: от участков с минимальным риском контаминации к участкам, где присутствуют продукты амплификации. Для разных зон используют раздельные халаты и иные средства индивидуальной защиты; при переходе между зонами их заменяют. Перчатки меняют при переходе к новому этапу работы, применяют наконечники с аэрозольными фильтрами, а оборудование и реагенты не перемещают обратно в предшествующие зоны. Эти меры предупреждают перенос загрязнителя воздушно-капельным, контактным и фомитным путями.
| Зона лаборатории | Основные операции | Основной риск | Требования к предотвращению контаминации |
|---|---|---|---|
| Зона приема и хранения образцов | Регистрация, сортировка и первичная обработка биоматериала | Перенос биологического материала между образцами | Раздельный инвентарь, смена перчаток, исключение обратного движения персонала и материалов |
| Зона экстракции ДНК | Лизис материала и выделение нуклеиновых кислот | Перекрестная контаминация образцов выделенной ДНК | Новые перчатки для этапа, фильтрующие наконечники, регулярная деконтаминация рабочих поверхностей |
| Зона приготовления реакционной смеси | Дозирование праймеров, зондов, ферментов и других компонентов ПЦР | Попадание ДНК или ампликонов в реактивы | Использование чистого специализированного оборудования и отдельного халата; реагенты не выносят в другие зоны |
| Зона внесения образца | Добавление выделенной ДНК в готовую реакционную смесь | Аэрозольное или контактное загрязнение соседних реакций | Работа в установленной последовательности, смена перчаток между этапами, минимизация образования аэрозолей |
| Постамплификационная зона | Открытие пробирок, анализ продуктов ПЦР, электрофорез или секвенирование | Высокая концентрация ампликонов и риск массовой контаминации | Запрет возврата халатов, оборудования и расходных материалов в пре-ПЦР-зоны; отдельная уборка и обеззараживание |
| Средства контроля | Постановка отрицательных контролей и контрольных проб | Необнаруженная контаминация серии исследований | Отрицательный контроль не должен содержать сигнала; его положительный результат требует оценки всей серии и поиска источника загрязнения |
Смена халата при переходе между зонами является частью зонирования, а не формальной процедурой. Особенно строгий режим требуется при работе с амплифицированной ДНК, поскольку она значительно устойчивее и многочисленнее исходной матрицы. Несоблюдение однонаправленного потока может вызвать ложноположительные результаты и нарушение достоверности судебно-медицинского генетического исследования. Эффективность противоконтаминационных мероприятий подтверждают внутренним контролем качества, отрицательными контролями и документированным мониторингом уборки.