2) с наибольшей концентрацией
3) любой концентрации
4) неизвестной концентрации
Градуировку хроматографа выполняют последовательным анализом стандартных растворов с известным содержанием определяемого вещества, начиная с минимальной концентрации и далее переходя к более высоким уровням. Такая последовательность позволяет получить корректную зависимость аналитического сигнала — площади или высоты хроматографического пика — от концентрации аналита и оценить линейность измерительного диапазона.
Введение наиболее разбавленного стандарта первым снижает риск переноса вещества из предыдущей пробы, загрязнения инжектора и колонки, а также завышения сигнала низкоконцентрированных растворов. При обратной последовательности остаточное количество аналита после концентрированного стандарта может вызвать эффект памяти и исказить нижние точки градуировочной характеристики, что особенно существенно при судебно-химическом определении токсикантов в следовых количествах.
| Этап или подход | Аналитическое значение | Возможные ошибки |
|---|---|---|
| Холостая проба | Контроль чистоты растворителя, системы и отсутствия фоновых пиков | Не позволяет построить градуировочную зависимость без стандартов |
| Стандарт с наименьшей концентрацией | Проверка чувствительности метода и нижней границы рабочего диапазона | Сигнал может быть искажён при наличии остаточного аналита |
| Последовательное повышение концентрации | Формирование градуировочной кривой и оценка её линейности | Нарушение порядка увеличивает влияние эффекта памяти |
| Стандарт с наибольшей концентрацией | Подтверждение верхней границы диапазона и отсутствия перегрузки детектора | При введении первым возможны насыщение и перенос аналита |
| Стандарт неизвестной концентрации | Не применяется для первичной градуировки, поскольку не имеет заданного опорного значения | Невозможно установить точную связь сигнала с концентрацией |
| Контрольный раствор | Независимая проверка правильности построенной градуировочной характеристики | Отклонение указывает на нестабильность системы или ошибку приготовления стандартов |
Правильная градуировка является обязательным условием количественного хроматографического анализа в судебно-экспертной практике. Она обеспечивает прослеживаемость результатов и позволяет достоверно определять содержание алкоголя, лекарственных средств, наркотических веществ и других токсикантов. После построения градуировочной зависимости обычно анализируют контрольный образец и оценивают допустимость отклонений. При выявлении нелинейности, переноса аналита или нестабильности сигнала систему очищают и градуировку повторяют.