2) санитарно-микробиологические исследования смывов с поверхностей рук работников, которые проводят ПЦР
3) отрицательный и положительный контроли ПЦР, контроль выделения ДНК (+)
4) мазок на COVID-19 сотрудника, выполняющего ПЦР
Правильный ответ — отрицательный и положительный контроли ПЦР в сочетании с положительным контролем выделения ДНК. Положительный контроль содержит нуклеиновую кислоту с известной целевой последовательностью и подтверждает работоспособность праймеров, зондов, ферментов и условий амплификации. Отрицательный контроль не содержит целевой матрицы; отсутствие в нём амплификационного сигнала свидетельствует об отсутствии контаминации реактивов и рабочего пространства.
Контроль выделения ДНК (+) проходит этап пробоподготовки и экстракции вместе с исследуемыми образцами. Его положительный результат подтверждает эффективность выделения нуклеиновой кислоты и отсутствие ингибиторов, способных вызвать ложноотрицательный результат. Совокупная оценка контролей позволяет разграничить истинный отрицательный результат образца, техническую неисправность реакции и загрязнение исследуемого материала или реактивов.
| Компонент контроля | Содержание | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Положительный контроль ПЦР | Матрица с известной целевой последовательностью | Подтверждает работоспособность системы амплификации; отсутствие сигнала указывает на неисправность реакции или реагентов |
| Отрицательный контроль ПЦР | Реакционная смесь без целевой нуклеиновой кислоты | Должен быть отрицательным; появление сигнала указывает на контаминацию |
| Положительный контроль выделения ДНК | Материал с известным содержанием целевой ДНК, проходящий весь этап экстракции | Оценивает эффективность выделения и выявляет присутствие ингибиторов ПЦР |
| Внутренний контроль амплификации | Отдельная контрольная мишень, добавленная в образец или реакцию | Позволяет отличить истинно отрицательный результат от ингибирования или потери материала |
| Маркер молекулярных масс | Стандарт фрагментов ДНК известного размера | Используется для ориентировочной оценки длины продуктов электрофореза, но не контролирует чистоту и корректность постановки ПЦР |
| Смывы с рук работников | Материал для санитарно-микробиологического контроля персонала | Не являются контрольной реакцией ПЦР и не подтверждают качество амплификации конкретного образца |
| Мазок на COVID-19 сотрудника | Клинический образец, исследуемый по отдельному диагностическому показанию | Не может заменить положительный, отрицательный или экстракционный контроль ПЦР |
Контрольные образцы должны обрабатываться с соблюдением установленной последовательности зон и правил предотвращения перекрёстной контаминации. Результаты серии считают валидными только при ожидаемом поведении всех обязательных контролей. При положительном отрицательном контроле или отрицательном положительном контроле результаты исследуемых образцов интерпретировать нельзя, и постановку необходимо повторить.