2) микроскопическое исследование структуры и количества хромосом
3) сравнительный анализ полиморфных локусов митохондриальной ДНК
4) составление родословной с анализом наследования определенных признаков
Методические указания № 98/253 регламентируют судебно-медицинское применение индивидуализирующих систем, основанных на полиморфизме длины амплифицированных фрагментов хромосомной ДНК. Исследованию подлежат гипервариабельные мини- и микросателлитные локусы — участки генома, в которых число повторяющихся нуклеотидных последовательностей значительно различается у разных людей. Благодаря высокой вариабельности сочетание аллелей нескольких независимых локусов формирует практически индивидуальный генетический профиль.
Метод включает выделение ядерной ДНК из биологического материала, амплификацию выбранных локусов с помощью полимеразной цепной реакции и определение длины полученных фрагментов. Различия в количестве тандемных повторов приводят к образованию ампликонов разной длины, которые регистрируются при электрофоретическом разделении. Затем аллельный профиль исследуемого следа сопоставляют с профилем сравнительного образца; совпадение оценивают не только качественно, но и статистически, с учетом частот выявленных аллелей в соответствующей популяции.
Цитогенетическое исследование числа и структуры хромосом предназначено преимущественно для диагностики хромосомных аномалий и не обладает необходимой индивидуализирующей способностью. Анализ митохондриальной ДНК применяется при исследовании сильно деградированных объектов и для установления родства по материнской линии, однако именно он не является предметом рассматриваемых указаний. Генеалогический метод позволяет прослеживать наследование признаков в семье, но не предусматривает непосредственного молекулярного исследования вещественных доказательств.
| Подход | Исследуемый объект или признак | Основной принцип | Судебно-экспертное значение |
|---|---|---|---|
| ПДАФ-анализ хромосомной ДНК | Высокополиморфные мини- и микросателлитные локусы | ПЦР-амплификация и сравнение длины аллельных фрагментов | Метод, непосредственно регламентируемый указаниями № 98/253 |
| Современное аутосомное STR-профилирование | Короткие тандемные повторы ядерной ДНК | Одновременная амплификация нескольких локусов и установление аллельного профиля | Идентификация личности, исследование биологических следов, установление близкого родства |
| Анализ митохондриальной ДНК | Полиморфные последовательности митохондриального генома | Сравнение гаплотипов, наследуемых преимущественно по материнской линии | Полезен при деградации ядерной ДНК, но хуже индивидуализирует человека |
| Y-хромосомное STR-исследование | Полиморфные локусы Y-хромосомы | Определение гаплотипа, передаваемого по мужской линии | Применяется для анализа мужского компонента смесей и патрилинейного родства |
| Кариотипирование | Количество и морфология хромосом | Микроскопическая оценка метафазных хромосом | Диагностика анеуплоидий и структурных перестроек, а не идентификация личности |
| Генеалогический метод | Фенотипические признаки и заболевания у родственников | Построение родословной и анализ типа наследования | Оценка наследственной природы признака без получения индивидуального ДНК-профиля |
Доказательственная сила молекулярно-генетической идентификации определяется совокупностью результатов по нескольким независимым локусам, а не совпадением одного генетического признака. Несовпадение обязательных аллелей может служить основанием для исключения происхождения биологического материала от конкретного лица. При полном согласовании профилей рассчитывают вероятность случайного совпадения либо отношение правдоподобия конкурирующих экспертных гипотез. Надежность вывода также зависит от соблюдения правил отбора образцов, предотвращения контаминации и корректной интерпретации смешанных или деградированных профилей.