2) наличие сперматозоидов в объекте исследования
3) гарантированное успешное генотипирование мужской ДНК
4) присутствие слюны в объекте исследования
Простатоспецифический антиген (ПСА, PSA, p30, калликреин-3) — сериновая протеаза, секретируемая преимущественно эпителием предстательной железы и содержащаяся в высокой концентрации в семенной плазме. Его физиологическая функция заключается в разжижении эякулята за счёт расщепления семеногелинов. Поэтому выявление ПСА в исследуемом объекте свидетельствует о наличии компонента семенной жидкости, а не непосредственно о присутствии половых клеток.
Иммунохроматографический анализ основан на специфическом взаимодействии антигена с моноклональными антителами. Экстракт исследуемого материала перемещается по мембране под действием капиллярных сил; ПСА связывается с мечеными антителами, а образовавшийся комплекс фиксируется вторыми антителами в тестовой зоне, формируя окрашенную линию. Контрольная линия подтверждает правильность миграции реагентов и работоспособность тест-системы.
Положительный результат не равнозначен обнаружению сперматозоидов: ПСА может выявляться в эякуляте мужчин с азооспермией, после вазэктомии или при разрушении клеточных элементов в старых пятнах. Кроме того, белковый маркер не характеризует количество, сохранность и пригодность ДНК для STR-генотипирования, поэтому успешное получение мужского генетического профиля не гарантируется. Для категорической экспертной интерпретации учитывают результаты микроскопии, дополнительных тестов на семенную жидкость, исследование ДНК и обстоятельства обнаружения объекта.
| Метод или маркер | Определяемый объект | Диагностическое значение | Основное ограничение |
|---|---|---|---|
| Иммунохроматографическое выявление ПСА/p30 | Белок секрета предстательной железы | Указывает на наличие компонентов семенной плазмы | Не доказывает присутствие сперматозоидов и требует интерпретации с учётом валидированных порогов теста |
| Выявление семеногелина | Белки секрета семенных пузырьков | Подтверждает наличие другого специфичного компонента семенной жидкости | Результат зависит от способа экстракции, разведения и сохранности белка |
| Микроскопия окрашенных препаратов | Головки и другие структуры сперматозоидов | Непосредственно подтверждает наличие мужских половых клеток | Может быть отрицательной при азооспермии, вазэктомии или выраженной деградации материала |
| Определение кислой фосфатазы | Фермент, содержащийся в высокой концентрации в семенной жидкости | Используется преимущественно как ориентировочная проба | Обладает меньшей специфичностью и не должна оцениваться изолированно |
| Аутосомное STR-генотипирование | Ядерная ДНК клеток, присутствующих в объекте | Позволяет установить индивидуализирующий генетический профиль | Результат зависит от количества и качества ДНК, примесей, ингибиторов и состава смеси |
| Y-STR-анализ | Локусы Y-хромосомы | Помогает выявлять мужской компонент в смешанных биологических следах | Не подтверждает природу биологической жидкости и обладает меньшей индивидуализирующей способностью |
| Определение слюнной α-амилазы | Белковый маркер слюны | Используется для установления слюнного происхождения следа | Не связано с обнаружением ПСА и требует отдельной тест-системы |
Таким образом, ПСА является маркером семенной плазмы, а не морфологическим признаком сперматозоидов. Отрицательная микроскопия при положительном тесте на ПСА возможна и не представляет методического противоречия. Результаты серологического и молекулярно-генетического исследований отвечают на разные экспертные вопросы: первое устанавливает вероятную природу биологического материала, второе — его генетические характеристики. Наиболее обоснованный вывод формируется при комплексной оценке нескольких независимых методов и надлежащих контрольных проб.