2) разрушения метаболитов
3) создания щелочной среды
4) осаждения белков (+)
Добавление 10% раствора натрия вольфрамата и 0,2 М серной кислоты применяют для осаждения белков крови. В кислой среде из вольфрамата натрия образуется малорастворимая вольфрамовая кислота, которая вместе с денатурированными белками формирует осадок. После центрифугирования получают относительно прозрачный надосадочный слой, содержащий высвобожденные лекарственные вещества и пригодный для дальнейшей экстракции и химико-токсикологического анализа.
Депротеинизация уменьшает матричное влияние белков, липопротеинов и клеточных компонентов, способных связывать определяемое соединение, загрязнять хроматографическую систему или препятствовать экстракции. Реакция не предназначена для создания щелочной среды: серная кислота, напротив, снижает pH. При указанных условиях также не ставится задача целенаправленного гидролиза конъюгатов или разрушения метаболитов, поскольку такие процессы могут изменить токсикологически значимый состав образца.
| Подход к пробоподготовке | Основной механизм | Назначение | Дифференциальный признак |
|---|---|---|---|
| Вольфрамат натрия и серная кислота | Денатурация и совместное осаждение белков в кислой среде | Получение депротеинизированного надосадочного слоя | Образуется выраженный белковый осадок; среда остается кислой |
| Трихлоруксусная или хлорная кислота | Кислотная денатурация белковых молекул | Быстрая депротеинизация биологических жидкостей | Возможна сильная ацидификация и необходимость последующей нейтрализации |
| Органические растворители | Снижение растворимости белков при добавлении ацетонитрила, метанола или ацетона | Пробоподготовка для хроматографических методов | Одновременно извлекаются многие низкомолекулярные соединения |
| Кислотный гидролиз | Расщепление глюкуронидных, сульфатных и других конъюгатов | Определение общего содержания вещества и его конъюгированных метаболитов | Требует нагревания или длительной выдержки при контролируемом pH |
| Щелочной гидролиз | Расщепление соединений, устойчивых в кислоте и чувствительных к щелочи | Высвобождение отдельных токсикантов или метаболитов | Создается щелочная, а не кислая среда; возможна деградация нестойких аналитов |
| Жидкостно-жидкостная экстракция | Распределение вещества между водной и органической фазами | Выделение и концентрирование лекарственных веществ | Эффективность зависит от pH, степени ионизации и коэффициента распределения аналита |
Качество осаждения контролируют по формированию плотного осадка и прозрачности надосадочной жидкости. Недостаточная депротеинизация повышает риск потери чувствительности, загрязнения аналитического оборудования и появления интерференций. При выборе дальнейшей экстракции учитывают кислотно-основные свойства лекарственного вещества, его устойчивость и степень связывания с белками плазмы. Таким образом, рассматриваемая смесь выполняет прежде всего функцию удаления белковой матрицы из образца крови.