2) для осаждения белков и создания кислой реакции среды
3) для высвобождения летучих продуктов метаболизма спиртов
4) для разрушения глюкуронитов спиртов
4% раствор пропанола используют как внутренний стандарт при количественном определении этанола и других низших спиртов алкилнитритным методом. В ходе анализа исследуемые спирты переводят в летучие алкилнитриты, после чего определяют их хроматографический сигнал. Пропанол вносится в известном постоянном количестве в исследуемую пробу, калибровочные растворы и контрольные образцы и проходит те же стадии подготовки и дериватизации, что и определяемые вещества.
Количественный расчёт основан не на абсолютной площади пика, а на отношении площади или высоты пика анализируемого соединения к сигналу внутреннего стандарта. Это компенсирует потери летучих компонентов при подготовке пробы, различия объёма вводимой пробы и колебания эффективности превращения спиртов в алкилнитриты. Пропанол выбирают потому, что он обладает сходными физико-химическими свойствами и участвует в аналогичной реакции, но при корректных условиях может быть надёжно отделён от исследуемых спиртов и продуктов их превращения.
Следовательно, правильный ответ отражает принцип внутреннего стандарта — способ повышения точности и воспроизводимости количественного анализа. Пропанол не предназначен для осаждения белков, разрушения конъюгатов спиртов с глюкуроновой кислотой или общего высвобождения метаболитов; такие операции требуют иных реагентов и специальных условий пробоподготовки.
| Компонент или этап | Функция в анализе | Аналитическое значение |
|---|---|---|
| Пропанол, 4% раствор | Внутренний стандарт | Служит эталоном для расчёта отношения сигналов и коррекции аналитических потерь |
| Исследуемый этанол и другие спирты | Определяемые вещества | После дериватизации образуют соответствующие алкилнитриты, пики которых используют для идентификации и количественной оценки |
| Алкилнитриты | Летучие производные спиртов | Обеспечивают возможность хроматографического разделения и регистрации соединений |
| Отношение площади пика аналита к площади пика стандарта | Основной количественный показатель | Используется совместно с градуировочной зависимостью для расчёта концентрации спирта |
| Осаждение белков | Отдельная операция пробоподготовки | Не является основной функцией пропанола; выполняется специальными осаждающими реагентами |
| Гидролиз глюкуронидов | Высвобождение конъюгированных метаболитов | Требует ферментативного или кислотного гидролиза и не обеспечивается добавлением внутреннего стандарта |
| Контроль качества | Проверка правильности и воспроизводимости метода | Проводится с образцами известной концентрации, содержащими тот же внутренний стандарт |
Внутренний стандарт должен добавляться в одинаковой концентрации во все анализируемые и контрольные образцы. Его пик обязан быть стабильным, хорошо отделяться от пиков определяемых соединений и не присутствовать в исходном биологическом материале в значимой концентрации. При отсутствии или неправильном внесении пропанола возрастает риск систематической ошибки в оценке концентрации алкоголя.