2) щелочью (+)
3) танином
4) сернокислой медью
Проба Гоппе—Зейлера основана на устойчивости карбоксигемоглобина к действию сильной щёлочи. При добавлении раствора гидроксида натрия или калия обычный оксигемоглобин разрушается с образованием щелочного гематина, вследствие чего окраска крови становится бурой или буро-зелёной. Карбоксигемоглобин сохраняет ярко-красную, нередко вишнёво-красную окраску, поскольку комплекс гемоглобина с угарным газом отличается высокой стабильностью.
Таким образом, диагностическим критерием положительной реакции является сохранение красной окраски исследуемой крови после добавления щёлочи, тогда как изменение окраски указывает преимущественно на отсутствие значимого количества карбоксигемоглобина. Разведение само по себе не обладает специфичностью, танин применяется главным образом для осаждения белков, а сернокислая медь не является реагентом данной качественной реакции.
Проба имеет ориентировочное, скрининговое значение и особенно применима при исследовании крови лиц, предположительно подвергшихся воздействию оксида углерода. В судебно-медицинской практике результат оценивают с учётом обстоятельств происшествия, цвета трупных пятен и других лабораторных данных; для количественного определения предпочтительны спектрофотометрия или кооксиметрия.
| Исследуемый компонент | Действие щёлочи | Окраска или результат | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Карбоксигемоглобин | Сохраняет устойчивый комплекс с гемом | Ярко-красная, вишнёво-красная | Положительная проба Гоппе—Зейлера |
| Оксигемоглобин | Переходит в щелочной гематин | Бурая, буро-зелёная | Отрицательная реакция на карбоксигемоглобин |
| Метгемоглобин | Не образует специфического устойчивого комплекса с CO | Коричневая | Может затруднять визуальную оценку окраски |
| Сульфгемоглобин | Сохраняет стойкий пигмент крови | Зеленоватая или зелёно-бурая | Возможная причина неспецифического изменения цвета |
| Разведение образца | Только уменьшает концентрацию пигментов | Ослабление окраски | Не является специфическим тестом на COHb |
| Танин | Осаждает белки | Образование осадка | Не используется как основной реагент пробы |
| Кооксиметрия | Раздельно измеряет фракции гемоглобина | Количественное содержание COHb | Предпочтительный подтверждающий метод |
Оксид углерода связывается с гемоглобином значительно прочнее кислорода и формирует карбоксигемоглобин, нарушая транспорт и отдачу кислорода тканям. Поэтому даже при сохранении красной окраски крови тяжесть отравления нельзя оценивать только по результату качественной пробы. Важны также клинические данные, концентрация COHb и условия забора и хранения образца. Правильный ответ — реакция с щёлочью.