2) минерализацией
3) перегонкой с водяным паром
4) диализом
Тонкослойная хроматография (ТСХ) применяется как ориентировочный скрининговый метод для выявления органических ксенобиотиков, которые извлекаются из биологического материала полярными растворителями либо концентрируются методом сорбции. На пластинку с неподвижной фазой, обычно силикагелем, наносят исследуемый экстракт и эталонные растворы; при движении подвижной фазы компоненты разделяются вследствие различий в полярности, адсорбции и растворимости. После элюирования вещества обнаруживают в ультрафиолетовом свете или с помощью группоспецифических цветных реактивов.
Диагностическое значение имеют положение пятна, рассчитанное как коэффициент удерживания Rf, соответствие окраски и интенсивности пятна контрольному стандарту, а также результаты параллельных проб. Для веществ, полученных полярной экстракцией или сорбцией, ТСХ позволяет одновременно исследовать несколько соединений и предварительно отнести их к определённой химико-токсикологической группе. Однако совпадение Rf и цветной реакции не является окончательным доказательством присутствия вещества, поэтому положительный результат подтверждают высоко специфичными методами, прежде всего газовой или жидкостной хроматографией с масс-спектрометрическим детектированием.
| Подход или объект исследования | Физико-химическая основа | Роль в химико-токсикологическом анализе |
|---|---|---|
| ТСХ-скрининг | Разделение соединений по различию в адсорбции и распределении между неподвижной и подвижной фазами | Быстрое предварительное выявление широкого спектра органических веществ и их групп |
| Полярная экстракция | Переход гидрофильных или ионизируемых соединений в полярный растворитель с учётом pH среды | Подготовка экстракта для последующего разделения и обнаружения методом ТСХ |
| Сорбционное концентрирование | Избирательное удерживание аналита на сорбенте с последующей десорбцией | Повышение концентрации малых количеств вещества и снижение влияния компонентов биоматериала |
| Минерализация | Разрушение органической матрицы кислотами или окислителями с переводом элементов в минеральную форму | Метод подготовки проб для определения металлов и некоторых неорганических токсикантов, а не типичная основа ТСХ-скрининга органических веществ |
| Перегонка с водяным паром | Соиспарение летучих веществ с водяным паром и последующая конденсация | Выделение летучих токсикантов, например низкомолекулярных спиртов и некоторых растворителей |
| Диализ | Прохождение низкомолекулярных соединений через полупроницаемую мембрану при задержке крупных молекул | Очистка и разделение по молекулярным размерам; самостоятельным методом ТСХ-идентификации не является |
| Подтверждающий анализ | Высокая селективность разделения в сочетании со спектральной или масс-спектрометрической регистрацией | Окончательная идентификация вещества и, при необходимости, его количественное определение |
Таким образом, ТСХ особенно рациональна на этапе первичного поиска органических токсикологически значимых веществ после их извлечения полярными растворителями или сорбционного концентрирования. Метод отличается простотой, доступностью и возможностью параллельного анализа нескольких проб. Результат оценивают только с учётом стандартов, контрольных реакций и матричных помех. Юридически значимое заключение основывают на подтверждении другим валидированным инструментальным методом.