2) первичная инактивация остатков биоматериала дезсредствами (+)
3) выделение ДНК
4) приготовление реакционных смесей
В зоне приема, регистрации, разбора и первичной обработки материала выполняют первичную инактивацию остатков биоматериала дезинфицирующими средствами. Это мероприятие направлено на снижение или устранение инфекционной опасности образцов, загрязненных поверхностей, одноразовых принадлежностей и отходов до их дальнейшего перемещения или утилизации. Инактивация проводится по утвержденному режиму с учетом спектра действия препарата, его концентрации, времени экспозиции и устойчивости предполагаемых возбудителей.
Данная операция относится к требованиям биологической безопасности и предупреждения профессионального заражения, а также к контролю перекрестной контаминации. Работы выполняют с применением средств индивидуальной защиты, в условиях разграничения чистых и загрязненных потоков; при необходимости используют бокс биологической безопасности. Дезинфекция должна быть совместима с исследуемым материалом и не заменяет соблюдение правил герметичной упаковки, маркировки, регистрации и транспортировки.
Выделение ДНК, приготовление реакционных смесей и амплификация относятся к последующим этапам молекулярно-генетического исследования и проводятся в специально выделенных помещениях или рабочих зонах. Такое разделение необходимо, поскольку продукты амплификации содержат большое количество копий нуклеиновой кислоты и могут стать источником ложноположительных результатов. Поэтому первичная обработка в приемной зоне имеет прежде всего санитарно-противоэпидемическое и организационное значение.
| Этап или операция | Основная цель | Место выполнения и ключевой принцип |
|---|---|---|
| Прием материала | Проверка целостности упаковки, соответствия сопроводительных документов и условий доставки | Приемная зона; нарушение упаковки фиксируют до вскрытия и дальнейшей обработки |
| Регистрация и маркировка | Обеспечение прослеживаемости образца и исключение подмены | Уникальный идентификатор, запись даты, времени, источника и ответственного сотрудника |
| Разбор и первичная сортировка | Оценка вида материала, его состояния, количества и пригодности для исследования | Рабочая зона первичной обработки; загрязненные и потенциально опасные объекты изолируют |
| Первичная инактивация остатков биоматериала | Снижение биологического риска и обеззараживание загрязненных поверхностей и отходов | Приемная зона; применяют валидированный режим дезинфекции с установленной экспозицией |
| Выделение ДНК | Получение очищенной нуклеиновой кислоты из клеточного или тканевого материала | Зона экстракции; используют отдельное оборудование и контроль отрицательных проб |
| Приготовление реакционных смесей | Формирование состава для последующей амплификации целевых участков ДНК | Чистая пре-ПЦР-зона; исключают попадание образцов и ампликонов |
| Амплификация ДНК | Многократное копирование выбранного фрагмента нуклеиновой кислоты | Амплификационная зона; продукты реакции не возвращают в чистые помещения |
Таким образом, первичная инактивация является обязательным элементом безопасного обращения с биологическим материалом на этапе его приема и сортировки. Ее выполнение снижает риск инфицирования персонала и распространения загрязнения по лаборатории. Разделение зон и направленности потоков обеспечивает достоверность последующих молекулярно-генетических исследований. Несоблюдение этих требований может привести одновременно к биологическим инцидентам и недостоверным экспертным выводам.