2) предварительное обнаружение методом фотоэлектрокалориметрии
3) извлечение (экстракция) яда из биологической жидкости (+)
4) предварительное обнаружение методом спектрофотометрии
Извлечение токсического вещества из биологической жидкости является ключевым этапом химико-токсикологического анализа, поскольку лекарственный препарат необходимо отделить от белков, липидов, пигментов и других компонентов биологического материала. При жидкостно-жидкостной экстракции или твердофазной экстракции используют различия в растворимости, липофильности и степени ионизации вещества; подбор pH позволяет перевести соединение преимущественно в органическую или водную фазу. Одновременно происходит концентрирование аналита, что особенно важно при небольшом объёме образца и низкой концентрации препарата у ребёнка.
Качество экстракции определяет чувствительность, специфичность и достоверность последующих исследований. Недостаточное извлечение приводит к ложноотрицательному результату, а присутствие компонентов матрицы может вызывать мешающие реакции и искажать количественную оценку. После пробоподготовки применяют хроматографические, спектральные и другие инструментальные методы для предварительного обнаружения, идентификации и количественного определения токсиканта; сами эти методы не заменяют выделение вещества из биологической жидкости.
Фотоэлектроколориметрия и спектрофотометрия основаны на измерении поглощения света окрашенным соединением или продуктом химической реакции и обычно используются как скрининговые либо вспомогательные методы. Тонкослойная хроматография на пластинке позволяет разделять вещества и ориентировочно идентифицировать их по величине Rf, однако её результат также зависит от качества предварительного извлечения и очистки пробы. Окончательное заключение желательно подтверждать валидированным методом, например высокоэффективной жидкостной или газовой хроматографией с масс-спектрометрическим детектированием.
| Этап анализа | Основная цель | Практическое значение |
|---|---|---|
| Отбор и регистрация образца | Получение крови, мочи, содержимого желудка или другого материала с указанием времени и условий забора | Предотвращает ошибочную интерпретацию с учётом времени после приёма препарата и возможного лечения |
| Предварительная пробоподготовка | Центрифугирование, отделение клеток, при необходимости осаждение белков | Снижает влияние биологической матрицы на последующее исследование |
| Экстракция | Перевод токсиканта в подходящую фазу и его концентрирование | Повышает выход вещества, чувствительность и избирательность анализа; является основным этапом |
| Предварительный скрининг | Быстрое обнаружение возможной группы лекарственных веществ | Может выполняться фотометрическими реакциями или тонкослойной хроматографией, но не всегда обеспечивает специфичность |
| Идентификация | Подтверждение химической природы соединения по спектру, времени удерживания или масс-спектру | Позволяет отличить токсикант от метаболитов и сходных лекарственных веществ |
| Количественное определение | Установление концентрации вещества в образце | Необходимо для оценки тяжести интоксикации, прогноза и контроля элиминации |
| Интерпретация результата | Сопоставление концентрации с клиническими данными, временем экспозиции и терапевтическим диапазоном | Концентрация препарата сама по себе не заменяет клиническую оценку и не всегда отражает выраженность токсического действия |
У детей интерпретация результатов требует учёта массы тела, возраста, незрелости ферментных систем печени и особенностей распределения лекарств. Для ряда препаратов токсичность определяется не только концентрацией в крови, но и активностью метаболитов и временем, прошедшим после приёма. Химико-токсикологическое заключение должно рассматриваться вместе с клиническими проявлениями, данными анамнеза и результатами мониторинга жизненно важных функций. Поэтому надёжная экстракция остаётся базой для последующей достоверной идентификации и количественной оценки токсиканта.