2) 48
3) 40
4) 37 (+)
Инкубацию взвеси эритроцитов с исследуемой сывороткой при выполнении непрямой пробы Кумбса проводят при 37 °C. Эта температура соответствует физиологическим условиям и оптимальна для взаимодействия эритроцитарных антигенов с иммуноглобулинами класса IgG, которые чаще всего имеют клиническое значение при иммуногематологических реакциях и являются тепловыми антителами.
Во время инкубации антитела сыворотки сенсибилизируют эритроциты, то есть фиксируются на их антигенах, однако обычно не вызывают видимой агглютинации из-за малого размера молекул IgG и недостаточного сближения клеток. После удаления несвязавшихся белков отмыванием добавляют антиглобулиновый реагент, содержащий антитела к человеческому IgG и/или компонентам комплемента. Агглютинация после этого этапа свидетельствует о наличии сенсибилизированных эритроцитов и расценивается как положительная реакция.
| Этап или вариант исследования | Температурные условия | Основное диагностическое значение |
|---|---|---|
| Инкубация сыворотки с тест-эритроцитами | 37 °C | Оптимальное выявление иммуноглобулинов IgG, реагирующих при температуре тела |
| Сенсибилизация эритроцитов | В период инкубации при 37 °C | Связывание антител сыворотки с соответствующими антигенами мембраны эритроцитов |
| Отмывание эритроцитов | После инкубации, по методике набора | Удаление несвязавшихся антител, способных нейтрализовать антиглобулиновый реагент |
| Добавление антиглобулинового реагента | После завершения отмывания | Сшивание сенсибилизированных IgG эритроцитов и визуализация агглютинации |
| Прямая проба Кумбса | Отдельная инкубация сыворотки с эритроцитами не требуется | Выявление антител или компонентов комплемента, уже фиксированных на эритроцитах in vivo |
| Реакции холодовых антител | Чаще активнее при 4–22 °C | Не являются основной целью стандартной инкубации непрямой пробы при 37 °C; типичны антитела IgM |
Температуры 46–48 °C не соответствуют стандартному физиологическому режиму антиглобулинового теста и могут нарушать стабильность эритроцитов, белков сыворотки и реагентов. Более низкая температура может снизить реакцию клинически значимых IgG-антител и привести к ложноотрицательному результату. Поэтому 37 °C является принципиальным условием корректного выявления антител, способных вызывать гемолиз или осложнения при гемотрансфузии.