2) иммуноферментного анализа
3) иммунофлуоресценции
4) иммуноблоттинга
Геном вируса гепатита C представляет собой одноцепочечную РНК положительной полярности. Для его выявления применяют полимеразную цепную реакцию с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР, RT-PCR): сначала фермент обратная транскриптаза синтезирует комплементарную ДНК на матрице вирусной РНК, после чего полученная ДНК многократно амплифицируется. В современных лабораториях преимущественно используют ПЦР в режиме реального времени, позволяющую проводить как качественное выявление РНК HCV, так и количественную оценку вирусной нагрузки.
Обнаружение РНК HCV свидетельствует о наличии текущей вирусной инфекции, включая раннюю фазу, когда антитела еще могут отсутствовать. Метод применяется для подтверждения активного гепатита C после положительного скринингового теста на anti-HCV, оценки вирусной нагрузки до и во время лечения, а также контроля вирусологического ответа. Для повышения чувствительности праймеры направляют на относительно консервативные участки генома, например 5′-нетранслируемую область или участок гена core.
Иммуноферментный анализ выявляет не геном вируса, а антитела к его антигенам; поэтому положительный результат anti-HCV может отражать как текущую, так и перенесенную инфекцию. Иммунофлуоресценция и иммуноблоттинг также основаны на выявлении антигенов или антител и не являются основными методами прямого обнаружения РНК HCV. Таким образом, именно ОТ-ПЦР соответствует принципу молекулярного выявления вирусного генома.
| Метод или вариант исследования | Что выявляется | Основное диагностическое значение | Интерпретация результата |
|---|---|---|---|
| Качественная ОТ-ПЦР | РНК HCV | Подтверждение наличия вируса в крови | Положительный результат указывает на текущую инфекцию |
| Количественная ОТ-ПЦР в реальном времени | Концентрация РНК HCV, обычно в МЕ/мл | Определение вирусной нагрузки и ее динамики | Используется для исходной оценки и контроля вирусологического ответа |
| Иммуноферментный анализ | Антитела anti-HCV | Первичный серологический скрининг | Положительный результат требует подтверждения исследованием РНК HCV |
| Иммуноблоттинг | Антитела к отдельным антигенам HCV | Дополнительная серологическая верификация, преимущественно историческое значение | Не позволяет надежно установить наличие активной виремии |
| Иммунофлуоресценция | Антигены или антитела с флуоресцентной меткой | Специализированная визуализация иммунологических реакций | Не является стандартным методом выявления генома HCV |
| РНК HCV не обнаружена при положительном anti-HCV | Отсутствие выявляемой вирусной РНК | Разграничение активной и неактивной инфекции | Возможны перенесенная инфекция, спонтанная элиминация или ложноотрицательный результат |
Диагноз активной инфекции гепатита C основывается на обнаружении РНК HCV, а не только на наличии антител. Отрицательный результат ПЦР при сохраняющемся клиническом подозрении может потребовать повторного исследования с учетом периода после заражения, качества образца и чувствительности тест-системы. Генотипирование HCV выполняют отдельными молекулярными методами и не заменяют стандартным качественным определением вирусной РНК. После успешной терапии отсутствие РНК HCV через 12 недель и более соответствует устойчивому вирусологическому ответу.