2) иммунофлюоресцентный метод
3) ИФА в лунках планшета
4) реакция преципитации в геле
Иммуноблоттинг является подтверждающим методом диагностики ВИЧ-инфекции, поскольку выявляет не только наличие антител, но и их реактивность к отдельным белкам вируса иммунодефицита человека. При проведении анализа вирусные антигены предварительно разделяют электрофорезом и фиксируют в виде полос на мембране. Сыворотка пациента наносится на мембрану, и при наличии специфических антител формируются полосы, соответствующие белкам ВИЧ, в частности p24, gp41, gp120/gp160 и другим антигенам групп gag, pol и env.
Подтверждающее значение имеет определённый профиль антител к нескольким вирусным белкам, установленный критериями применяемой тест-системы. Это позволяет отличить истинную серологическую реакцию от неспецифического результата первичного скрининга. Отрицательный иммуноблоттинг при реактивном скрининговом тесте обычно свидетельствует об отсутствии подтверждённой сероконверсии, однако при раннем периоде инфекции или наличии факторов риска требуется повторное исследование и/или выявление РНК ВИЧ методом амплификации нуклеиновых кислот.
Иммуноферментный анализ относится преимущественно к скрининговым методам: он обладает высокой чувствительностью, но отдельная положительная реакция не является достаточным основанием для окончательного установления диагноза. Иммунофлюоресцентный метод и реакция преципитации в геле могут использоваться для выявления антител, но не являются стандартным основным подтверждающим тестом в классическом алгоритме. В современных диагностических стратегиях иммуноблоттинг во многих лабораториях заменяется специфическим дифференцирующим иммунологическим тестом и подтверждением неопределённых или дискордантных результатов методом выявления РНК ВИЧ.
| Метод | Что выявляет | Основная диагностическая роль | Особенности интерпретации |
|---|---|---|---|
| ИФА/хемилюминесцентный иммуноанализ | Антитела к ВИЧ, а в тестах 4-го поколения также антиген p24 | Первичный скрининг | Реактивный результат требует подтверждения; возможны неспецифические реакции |
| Иммуноблоттинг | Антитела к индивидуальным белкам ВИЧ | Подтверждение специфичности серологической реакции | Оценивается характерный профиль полос; возможны отрицательный, положительный и неопределённый результаты |
| Иммунофлюоресцентный метод | Связывание антител пациента с антигенами ВИЧ в клеточном субстрате | Дополнительное исследование | Зависит от качества клеточного субстрата и субъективности оценки свечения |
| Реакция преципитации в геле | Иммунные комплексы антиген–антитело | Исторически применявшийся серологический метод | Недостаточная чувствительность для рутинного подтверждения ВИЧ-инфекции |
| ПЦР/амплификация нуклеиновых кислот | РНК ВИЧ в плазме или провирусную ДНК в клетках | Подтверждение ранней инфекции и разрешение дискордантных результатов | Особенно важна в период серологического окна, когда антитела ещё не определяются |
| Неопределённый иммуноблоттинг | Отдельные, но неполные или нетипичные полосы антител | Требует уточняющей диагностики | Проводят повторное серологическое исследование и тестирование на РНК ВИЧ с учётом клинической ситуации |
Таким образом, иммуноблоттинг подтверждает ВИЧ-инфекцию за счёт демонстрации антител к нескольким специфическим вирусным белкам. Результат необходимо оценивать совместно со скрининговым тестом, сроками возможного инфицирования и клиническими данными. При подозрении на острую инфекцию отрицательная или неопределённая серология не исключает заболевание. Окончательный диагностический алгоритм определяется действующими национальными рекомендациями и используемой лабораторной системой.