2) тампоном из верхней трети слоя среды (с поверхности!), не взбалтывая пробирки (!)
3) петлей из верхней трети слоя среды (но не с поверхности!), не взбалтывая пробирки (!) (+)
4) петлей с нижней трети слоя среды (но не со дна!), не взбалтывая пробирки (!)
Правильная техника предусматривает отбор материала бактериологической петлёй из верхней трети жидкой среды накопления, но ниже её поверхности, без предварительного перемешивания. Она соответствует регламентированной схеме бактериологической диагностики кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулёза. Холодовое обогащение при температуре около 6 ± 2 °C основано на психротрофности иерсиний — способности сохраняться и размножаться при низкой температуре, при которой рост значительной части сопутствующей микрофлоры замедляется.
Пробирку не взбалтывают, чтобы не нарушать сформировавшееся распределение микроорганизмов в среде и не переносить на плотный агар избыточное количество осадка и конкурирующей микрофлоры. Забор непосредственно с поверхности также нежелателен из-за возможного скопления поверхностной плёнки и посторонних аэробных микроорганизмов. Использование стандартной петли позволяет перенести небольшой дозированный объём материала и получить изолированные колонии на средах с бромтимоловым синим, Эндо или Мак-Конки для последующей идентификации.
После первого высева исследование не прекращают при отрицательном результате: холодовое обогащение продолжают, выполняя повторные высевы в установленные сроки. При исследовании материала с обильной сопутствующей флорой перед посевом может применяться кратковременная щелочная обработка, основанная на сравнительно большей устойчивости иерсиний к действию щёлочи. Выделенные подозрительные колонии идентифицируют по морфологическим, культуральным, биохимическим и антигенным свойствам.
| Этап или критерий | Методическое значение |
|---|---|
| Холодовое обогащение | Инкубация материала в жидкой среде накопления при 6 ± 2 °C создаёт преимущество для психротрофных иерсиний. |
| Срок первого высева | Первичный перенос на плотные среды выполняют на 2–3-и сутки обогащения. |
| Зона отбора | Материал забирают из верхней трети столба жидкости, погружая петлю ниже поверхности. |
| Состояние пробирки | Содержимое не взбалтывают, чтобы не переносить осадок и избыточную сопутствующую микрофлору. |
| Плотные среды | Применяют среду с бромтимоловым синим, Эндо, Мак-Конки и другие разрешённые дифференциально-диагностические среды. |
| Повторные высевы | При отсутствии роста исследование продолжают с высевами на 5–7-е и, при необходимости, на 10–15-е сутки. |
| Подтверждение культуры | Учитывают окраску по Граму, культуральные признаки, биохимический профиль, серологические характеристики и результаты молекулярных методов. |
Соблюдение места и способа отбора материала непосредственно влияет на селективность и чувствительность культурального исследования. Нарушение техники, особенно взбалтывание пробирки или забор поверхностной плёнки, может привести к обильному росту посторонней флоры и затруднить обнаружение единичных колоний иерсиний. Отрицательный первый высев не исключает инфекцию, поскольку накопление возбудителя может происходить медленно. Окончательный результат оценивают с учётом всех последовательных высевов и полной идентификации выделенной культуры.