2) Enterococcus faecium
3) Vibrio parahaemolyticus
4) Listeria monocytogenes (+)
Энтероцины — рибосомально синтезируемые антимикробные пептиды, продуцируемые отдельными штаммами энтерококков, прежде всего Enterococcus faecium и Enterococcus faecalis. Для них характерна преимущественная активность против грамположительных бактерий. Наиболее типичной и практически значимой мишенью является Listeria monocytogenes, что используется в исследованиях биоконсервации пищевых продуктов и при изучении антагонистических свойств пробиотических штаммов.
Механизм действия энтероцинов связан с электростатическим взаимодействием с цитоплазматической мембраной чувствительной клетки, образованием в ней пор и последующей утечкой ионов и низкомолекулярных метаболитов. Для ряда энтероцинов дополнительной мишенью служит липид II — переносчик предшественников пептидогликана; его связывание нарушает синтез клеточной стенки. У L. monocytogenes отсутствует наружная мембрана, характерная для грамотрицательных бактерий, поэтому антимикробному пептиду легче достигнуть цитоплазматической мембраны.
Чувствительность определяется конкретным энтероцином и свойствами штамма-продуцента и реципиента. Энтерококки могут обладать специфическими механизмами иммунитета к собственному бактериоцину, поэтому наличие видовой принадлежности не означает обязательной чувствительности. В отличие от вибрионов, листерии и другие грамположительные бактерии значительно чаще входят в спектр действия энтероцинов, что обосновывает выбор Listeria monocytogenes.
| Микроорганизм | Типичная чувствительность к энтероцинам | Интерпретация |
|---|---|---|
| Listeria monocytogenes | Часто высокая, но штамм-зависимая | Наиболее характерная мишень; поражение цитоплазматической мембраны приводит к быстрой потере жизнеспособности |
| Enterococcus faecium | Возможна; варьирует у разных штаммов | Вид является одним из основных продуцентов энтероцинов; штаммы-продуценты обычно защищены от собственного пептида |
| Enterococcus faecalis | Возможна, но не универсальна | Отдельные штаммы синтезируют, например, AS-48; чувствительность определяется наличием систем иммунитета и строением мембраны |
| Staphylococcus aureus | Переменная | Грамположительная клеточная оболочка делает воздействие возможным, однако активность зависит от конкретного энтероцина |
| Clostridium spp. | Возможна у чувствительных штаммов | Некоторые энтероцины подавляют рост клостридий, но этот признак не является универсальным для всего рода |
| Vibrio parahaemolyticus | Обычно низкая или непостоянная | Грамотрицательная наружная мембрана ограничивает доступ многих энтероцинов к цитоплазматической мембране |
| Другие грамотрицательные бактерии | Как правило, низкая; возможна у отдельных широкоспектральных энтероцинов | Результат зависит от проницаемости наружной мембраны, наличия защитных структур и специфичности пептида |
В лабораторных исследованиях антагонистическую активность энтерококка оценивают методом диффузии в агаре или постановкой теста газон — лунка . Для подтверждения именно бактериоциновой природы эффекта культуральный супернатант нейтрализуют по pH, обрабатывают каталазой и проверяют чувствительность активности к протеазам. Сохранение зоны ингибиции после устранения действия органических кислот и перекиси водорода при последующей протеазочувствительности поддерживает идентификацию энтероцина.