2) суспензию (+)
3) метаболиты
4) бульонную культуру
Правильный ответ — суспензия тестируемого микроорганизма. Большинство миниатюрных систем для идентификации энтеробактерий содержит в лунках высушенные субстрат, индикатор и питательную основу; после внесения стандартизованной клеточной суспензии они восстанавливаются и обеспечивают условия для проведения биохимических реакций.
Суспензию обычно готовят из изолированной чистой культуры в стерильном физиологическом растворе или специальном разбавителе, доводя ее мутность до заданного стандарта, например 0,5 по Мак-Фарланду. Клетки микроорганизма метаболизируют субстраты в отдельных лунках, а образующиеся продукты изменяют pH, окислительно-восстановительное состояние или другой регистрируемый показатель, что проявляется изменением окраски, флуоресценции или помутнения. Совокупность реакций формирует биохимический профиль, используемый для видовой идентификации.
Чистая культура является исходным материалом для приготовления инокулюма, но непосредственно в лунки вносится именно ее стандартизованная суспензия. Метаболиты не содержат необходимого количества жизнеспособных клеток для выполнения реакций, а бульонная культура может иметь неодинаковую концентрацию клеток и содержать компоненты питательной среды, способные повлиять на результат. Поэтому стандартизация суспензии повышает воспроизводимость и достоверность идентификации.
| Материал или этап | Содержание | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Изолированная чистая культура | Колонии одного предполагаемого вида, полученные на плотной питательной среде | Необходима для исключения смешанной культуры и получения достоверного биохимического профиля |
| Стандартизованная суспензия | Равномерная взвесь клеток в физиологическом растворе или специальном разбавителе | Является непосредственным инокулюмом для лунок тест-системы |
| Плотность инокулюма | Регламентированная мутность, часто соответствующая стандарту Мак-Фарланда | Предотвращает ложно слабые или чрезмерно интенсивные реакции из-за недостатка или избытка клеток |
| Высушенная смесь в лунке | Субстрат, питательная основа и индикатор в стабильной сухой форме | После внесения суспензии восстанавливается и создает условия для определенной биохимической реакции |
| Метаболиты микроорганизма | Продукты обмена веществ, накопленные в культуральной жидкости | Не заменяют клеточный инокулюм и не обеспечивают выполнение полного набора реакций |
| Бульонная культура | Клетки, выращенные в жидкой питательной среде вместе с ее компонентами и продуктами метаболизма | Обычно не используется как стандартизованный инокулюм из-за вариабельной концентрации и возможного влияния среды |
| Учет результатов | Регистрация изменения цвета, флуоресценции, помутнения или иных реакционных признаков | Полученный профиль сопоставляют с базой данных или ключом идентификации |
Перед постановкой теста необходимо подтвердить чистоту культуры и соответствие морфологических и культуральных признаков предполагаемой группе энтеробактерий. Нарушение стандарта мутности, использование старой культуры или недостаточная регидратация лунок могут привести к ошибочному профилю. Интерпретацию биохимических реакций проводят с учетом контроля качества и, при необходимости, подтверждают дополнительными тестами или масс-спектрометрией.