2) натрий хлористый
3) натрий-аммоний фосфорнокислый
4) натрия гипсульфит
Буферным компонентом среды Хью—Лейфсона служит фосфат калия, обычно гидрофосфат калия (K2HPO4). Он поддерживает относительно стабильную реакцию среды и препятствует резким колебаниям pH, возникающим при образовании органических кислот в процессе утилизации глюкозы. Благодаря этому изменение окраски индикатора бромтимолового синего становится информативным показателем кислотообразования.
Среда применяется в оксидационно-ферментационном тесте Хью—Лейфсона для дифференциации бактерий по способу метаболизма углеводов. Низкая концентрация пептона уменьшает образование щелочных продуктов при распаде белков, а небольшое количество агара создаёт полужидкую среду, в которой возможно распространение продуктов метаболизма. В один из двух засеянных столбиков дополнительно вносят стерильное вазелиновое масло, ограничивая доступ кислорода.
Хлорид натрия выполняет преимущественно осморегулирующую функцию, а не поддерживает буферную ёмкость среды. Фосфат калия обеспечивает корректную оценку реакции: при ферментации глюкозы среда закисляется в обоих столбиках, при окислительном метаболизме — главным образом в аэробной, открытой пробирке, тогда как при отсутствии утилизации углевода окраска существенно не меняется.
| Компонент или условие теста | Функция | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Гидрофосфат калия | Фосфатная буферная система, стабилизация pH | Обеспечивает достоверную регистрацию подкисления среды |
| Глюкоза | Исследуемый углевод | Субстрат для выявления ферментации или окисления |
| Бромтимоловый синий | Кислотно-основный индикатор | Переход от зелёного к жёлтому указывает на образование кислоты |
| Открытая пробирка | Сохраняет доступ кислорода | Позволяет выявить аэробное окисление глюкозы |
| Пробирка под слоем масла | Создаёт ограниченно анаэробные условия | Помогает отличить ферментативный тип метаболизма от окислительного |
| Ферментативный тип | Образование кислоты без обязательного участия кислорода | Пожелтение обеих пробирок, обычно более выраженное в толще среды |
| Окислительный тип | Кислотообразование преимущественно при наличии кислорода | Пожелтение верхнего слоя открытой пробирки при сохранении исходной окраски в закрытой |
Таким образом, фосфат калия в среде Хью—Лейфсона выполняет именно буферную функцию и является необходимым компонентом для интерпретации изменения pH. Результат теста оценивают с учётом различий между аэробными и ограниченно анаэробными условиями. Метод особенно полезен при дифференциации грамотрицательных неферментирующих бактерий и представителей семейства Enterobacterales. Окончательное заключение должно учитывать чистоту культуры, длительность инкубации и выраженность изменения окраски.