2) гидрокарбонат натрия
3) натрий-аммоний фосфорнокислый
4) калий фосфорнокислый (+)
Калий фосфорнокислый, обычно представленный монокалийфосфатом KH2PO4, выполняет в среде для определения уреазной активности буферную функцию. Он поддерживает заданное исходное значение pH и ограничивает его неспецифические колебания, обусловленные компонентами питательной основы или метаболизмом исследуемой культуры. Благодаря этому изменение реакции среды можно связать преимущественно с ферментативным гидролизом мочевины.
Уреаза расщепляет мочевину с образованием аммиака и углекислого газа. Аммиак связывает ионы водорода, вследствие чего pH среды повышается, а кислотно-основный индикатор, чаще феноловый красный, приобретает розовую или малиново-красную окраску. Фосфатный буфер не препятствует выявлению положительной реакции, но обеспечивает её воспроизводимость и снижает риск ложной интерпретации результатов.
| Компонент или признак | Функция в уреазной пробе | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Калий фосфорнокислый | Поддерживает стабильный исходный pH среды | Обеспечивает специфичность регистрации ощелачивания при гидролизе мочевины |
| Мочевина | Служит субстратом для фермента уреазы | Её расщепление подтверждает наличие уреазной активности у микроорганизма |
| Феноловый красный | Выступает кислотно-основным индикатором | При повышении pH окрашивает среду в розовый или малиновый цвет |
| Аммиак | Образуется при ферментативном гидролизе мочевины | Вызывает ощелачивание среды и формирование положительной реакции |
| Натрия хлорид | Поддерживает осмотическое равновесие | Не является основным буферным компонентом уреазной среды |
| Положительная реакция | Характеризуется быстрым или постепенным ощелачиванием | Типична, в частности, для Proteus spp., Morganella spp. и Providencia spp. |
| Отрицательная реакция | Сопровождается сохранением исходной окраски среды | Указывает на отсутствие выявляемой уреазной активности в установленный срок |
Уреазная проба применяется как дифференциально-диагностический тест при идентификации энтеробактерий, неферментирующих грамотрицательных бактерий и некоторых других микроорганизмов. Скорость появления окраски также имеет значение: выраженные продуценты уреазы вызывают ощелачивание значительно быстрее слабоположительных культур. Результат оценивают только при наличии роста и с учётом регламентированного времени инкубации. Фосфатный буфер делает реакцию стандартизированной и позволяет достоверно сопоставлять результаты различных изолятов.