2) темнопольной микроскопии
3) прямой иммунофлуоресценции
4) люминесцентной микроскопии (+)
Люминесцентная микроскопия повышает чувствительность бактериоскопического исследования благодаря окрашиванию кислотоустойчивых микобактерий флуорохромами, чаще аурамином или комбинацией аурамин–родамин. При облучении ультрафиолетовым или сине-фиолетовым светом микобактерии дают яркое свечение на тёмном фоне, что облегчает их обнаружение даже при относительно небольшом количестве возбудителя в клиническом материале.
Дополнительное преимущество метода связано с возможностью просматривать препарат при меньшем увеличении, чем при классической микроскопии мазка, окрашенного по Цилю–Нильсену. За одинаковое время исследуется значительно большая площадь мазка, поэтому вероятность выявления редких кислотоустойчивых бактерий возрастает. Положительный результат подтверждает наличие кислотоустойчивых микроорганизмов, однако для видовой идентификации комплекса Mycobacterium tuberculosis требуются культуральные или молекулярно-генетические методы.
| Метод | Диагностический принцип | Основное преимущество | Ограничение |
|---|---|---|---|
| Люминесцентная микроскопия | Флуоресценция микобактерий после окраски аурамином или аурамин–родамином | Повышенная чувствительность и быстрое исследование большой площади мазка | Не обеспечивает точной видовой идентификации возбудителя |
| Микроскопия по Цилю–Нильсену | Выявление кислотоустойчивых бактерий после окрашивания карболовым фуксином | Простота, доступность и высокая специфичность при выраженном бактериовыделении | Меньшая чувствительность при низкой концентрации микобактерий |
| Темнопольная микроскопия | Визуализация тонких неокрашенных микроорганизмов в рассеянном свете | Полезна для обнаружения спирохет | Не является стандартным методом диагностики туберкулёза |
| Прямая иммунофлуоресценция | Связывание меченых антител непосредственно с антигеном | Быстрое выявление специфического антигена | Не применяется как основной способ повышения чувствительности обычной бактериоскопии при туберкулёзе |
| Непрямая иммунофлуоресценция | Выявление комплекса антиген–антитело с помощью вторичных флуоресцирующих антител | Усиление флуоресцентного сигнала | Требует специфических антител и более сложной постановки реакции |
| Молекулярно-генетическое исследование | Обнаружение ДНК микобактерий методом амплификации нуклеиновых кислот | Высокая чувствительность, видовая идентификация и выявление лекарственной устойчивости | Не относится к бактериоскопическим методам |
Люминесцентная микроскопия особенно полезна при массовом исследовании образцов мокроты и других материалов с предполагаемой низкой бактериальной нагрузкой. Любой положительный мазок должен оцениваться совместно с клиническими и рентгенологическими данными. Отрицательный результат не исключает туберкулёз, поскольку чувствительность микроскопии зависит от качества материала и интенсивности бактериовыделения. Окончательная верификация диагноза проводится культуральными и молекулярно-генетическими методами.