2) натрий лимоннокислый (+)
3) глицерин
4) мочевина
Дифференцирующим фактором среды Симмонса является натрий лимоннокислый, поскольку он служит единственным источником углерода. Исследуемый микроорганизм должен обладать транспортными системами и ферментами, позволяющими усваивать цитрат; поэтому среда выявляет признак цитрат-утилизации и используется для дифференциации близких по культуральным свойствам бактерий, особенно представителей порядка Enterobacterales.
При использовании цитрата и аммонийных солей происходит образование щелочных продуктов обмена, вследствие чего повышается pH среды. Индикатор бромтимоловый синий изменяет окраску с зелёной на синюю; одновременно обычно отмечается рост культуры. Отсутствие роста и сохранение исходной окраски расценивают как отрицательную реакцию. Казеиновый гидролизат и глицерин не являются определяющими субстратами данного теста, а мочевина используется в средах для выявления уреазной активности.
| Компонент или результат | Роль в тесте | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Натрий лимоннокислый | Единственный источник углерода | Определяет способность бактерии утилизировать цитрат; является дифференцирующим фактором |
| Аммонийные соли | Источник азота | Участвуют в метаболизме, сопровождающемся ощелачиванием среды |
| Бромтимоловый синий | Кислотно-основный индикатор | Переход зелёной окраски в синюю указывает на повышение pH |
| Рост микроорганизма | Использование цитрата как питательного субстрата | Поддерживает положительную интерпретацию реакции |
| Отсутствие роста и сохранение зелёного цвета | Цитрат не используется в условиях теста | Отрицательная реакция на утилизацию цитрата |
| Казеиновый гидролизат | Содержит разнообразные органические питательные вещества | Не применяется как специфический дифференцирующий субстрат среды Симмонса |
| Мочевина | Субстрат для определения уреазной активности | Характерна для мочевинных сред, а не для цитратного теста Симмонса |
Результат оценивают после инкубации чистой культуры при соблюдении стандартных условий посева и сроков учёта. Чрезмерный посев может привести к ложноположительной реакции за счёт переноса питательных веществ с исходной среды, поэтому используют минимальное количество инокулюма. Тест на цитрат следует интерпретировать вместе с другими биохимическими признаками, поскольку отдельная реакция не заменяет видовую идентификацию микроорганизма.