2) корд-фактора микрокапсулы
3) миколовых кислот клеточной стенки
4) липидов клеточной стенки
Правильный признак — выявление полярно расположенных зёрен волютина, или метахроматических гранул Бабеша—Эрнста. Это внутриклеточные включения, содержащие преимущественно полифосфаты; у коринебактерий они часто располагаются на полюсах булавовидно утолщённых клеток. В сочетании с грамположительными полиморфными палочками, V- и L-образными скоплениями и характерным частоколом данный признак имеет важное ориентировочное значение при микроскопической идентификации, особенно для Corynebacterium diphtheriae.
Зёрна волютина выявляют специальными методами окраски, прежде всего по Нейссеру или Альберту: гранулы окрашиваются в контрастный тёмно-синий, фиолетовый или почти чёрный цвет, тогда как цитоплазма имеет другую окраску. Эффект метахромазии обусловлен тем, что полифосфатные включения изменяют оттенок основного красителя. Выраженность гранул зависит от вида коринебактерий, фазы роста и состава питательной среды, поэтому их отсутствие не исключает род; окончательное заключение требует совокупной оценки морфологии, культуральных и биохимических свойств.
Корд-фактор, значительное содержание миколовых кислот и липидов клеточной стенки прежде всего характеризуют микобактерии. Корд-фактор представляет собой трегалозо-6,6′-димиколат и связан с вирулентностью Mycobacterium tuberculosis, а длинноцепочечные миколовые кислоты обусловливают кислотоустойчивость. У коринебактерий также могут присутствовать короткоцепочечные кориномиколовые кислоты, однако эти компоненты не являются специфическим рутинным критерием их идентификации.
| Признак | Коринебактерии | Микобактерии | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Морфология клеток | Плеоморфные грамположительные палочки, часто булавовидные; возможны V- и L-образные формы, частокол | Тонкие прямые или слегка изогнутые палочки, нередко расположенные одиночно или в скоплениях | Позволяет ориентировочно различать роды при первичной микроскопии |
| Зёрна волютина | Часто выражены на полюсах клеток; выявляются окраской по Нейссеру или Альберту | Не являются характерным диагностическим признаком | Наиболее специфичный из представленных в задании морфологических ориентиров для коринебактерий |
| Окраска по Граму | Грамположительные, окрашивание может быть неравномерным из-за полиморфизма и возраста культуры | Грамположительные, но часто плохо окрашиваются обычным методом | Результат оценивают вместе с формой клеток и особенностями расположения |
| Миколовые кислоты | Могут присутствовать короткоцепочечные кориномиколовые кислоты, но выраженной кислотоустойчивости обычно нет | Содержат большое количество длинноцепочечных миколовых кислот | Характерны для микобактерий и лежат в основе кислотоустойчивости |
| Корд-фактор | Не используется как типичный критерий идентификации коринебактерий | Трегалозо-6,6′-димиколат, ассоциирован с вирулентностью и ростом жгутами | Признак, связанный преимущественно с патогенными микобактериями |
| Липиды клеточной стенки | Присутствуют, но их наличие само по себе неспецифично | Содержание липидов значительно; они определяют устойчивость клеточной стенки и кислотоустойчивость | Общее выявление липидов не позволяет надёжно идентифицировать коринебактерии |
| Подтверждение вида | Культуральные и биохимические тесты, MALDI-TOF масс-спектрометрия или молекулярные методы | Кислотоустойчивая окраска, культуральное исследование и молекулярная идентификация | Микроскопический признак служит ориентиром, но не заменяет видовую верификацию |
В лабораторной практике полярные гранулы особенно полезны при исследовании материала, подозрительного на дифтерию, однако их наличие необходимо подтверждать выделением культуры. Для C. diphtheriae дополнительно оценивают рост на селективных средах, биохимические свойства и наличие гена токсина или продукцию дифтерийного токсина. Следует различать идентификацию возбудителя и установление его токсигенности: это самостоятельные этапы диагностики. Комплексная оценка повышает точность результата и предотвращает ошибочную трактовку отдельных морфологических признаков.