2) разрушения эритроцитов
3) коагуляции плазмы
4) разложения каолина
Лецитиназа Clostridium perfringens, соответствующая α-токсину бактерии, является фосфолипазой C. Фермент гидролизует лецитовителлин — липопротеиновый комплекс яичного желтка, содержащий фосфатидилхолин. В результате расщепления фосфолипида образуются фосфорилхолин и диацилглицерин, изменяются дисперсность и растворимость липидных частиц, что проявляется помутнением среды и формированием белого опалесцирующего ободка.
Прозрачность контрольной пробирки указывает на отсутствие ферментативного гидролиза: активная лецитиназа в ней отсутствует либо нейтрализована специфической антитоксической сывороткой. В опытной пробирке сохранённая активность α-токсина вызывает разложение субстрата, поэтому интенсивность помутнения зависит от количества фермента. При количественной постановке исследуют последовательные разведения материала и определяют наибольшее разведение, в котором сохраняется характерная реакция с лецитовителлином.
| Диагностический признак или реакция | Биологическая основа | Характерный результат | Дифференциальное значение |
|---|---|---|---|
| Реакция с лецитовителлином | Гидролиз фосфатидилхолина α-токсином | Помутнение и белый опалесцирующий ободок | Выявляет и позволяет количественно оценивать лецитиназную активность |
| Нейтрализация антитоксической сывороткой | Связывание и инактивация α-токсина | Отсутствие помутнения в контрольной пробе | Подтверждает специфичность реакции |
| Реакция Наглера на желточном агаре | Расщепление лецитина в плотной питательной среде | Зона опалесценции вокруг колоний, подавляемая антитоксином | Используется для идентификации лецитиназоположительных клостридий |
| Гемолиз эритроцитов | Действие гемолизинов и мембранотоксинов | Просветление эритроцитарной взвеси или зона гемолиза | Не объясняет белое помутнение лецитовителлиновой среды |
| Коагуляция плазмы | Превращение фибриногена в фибрин под действием коагулазы | Образование сгустка | Характерна прежде всего для коагулазоположительных стафилококков |
| Расщепление каолина | Не относится к ферментативным свойствам C. perfringens | Специфическая диагностическая реакция отсутствует | Каолин может применяться как сорбент, но не как субстрат лецитиназы |
α-Токсин имеет важное значение не только для лабораторной идентификации, но и для патогенеза клостридиальной инфекции. Повреждение фосфолипидов клеточных мембран способствует гемолизу, некрозу тканей, повышению сосудистой проницаемости и развитию системной интоксикации. Выраженная лецитиназная активность служит одним из характерных биохимических признаков токсигенных штаммов C. perfringens. Специфическое подавление реакции антитоксином позволяет отличить истинное действие фосфолипазы C от неспецифического помутнения среды.