2) окраску по Романовскому – Гимзе
3) окраску по Мак-Манусу
4) окраску эриохром черным
Для первичного выявления Candida spp. в биоматериале применяют препарат раздавленная капля — нативный препарат, в котором исследуемый материал помещают между предметным и покровным стеклом и осторожно распластывают. При микроскопии обнаруживаются округлые или овальные дрожжеподобные клетки, почкование, скопления бластоконидий и, у некоторых видов, псевдогифы. Сочетание дрожжевых клеток с почкованием и псевдомицелием является характерным морфологическим признаком кандид, однако не всегда позволяет установить вид.
Метод не требует фиксации и окрашивания, поэтому сохраняются естественные размеры и взаимное расположение элементов гриба; при необходимости используют световую микроскопию с фазово-контрастным режимом. Окраска по Романовскому—Гимзе и метод Мак-Мануса (PAS-реакция) могут применяться для выявления грибковых структур в отдельных типах материала, особенно в гистологических срезах, но для быстрой первичной оценки наличия дрожжеподобных грибов стандартным является нативный препарат. Интерпретация результата зависит от локализации: в материале из стерильных в норме тканей выявление Candida имеет большее диагностическое значение, тогда как в мазках со слизистых необходимо отличать колонизацию от инфекционного процесса.
| Метод | Основной диагностический признак | Практическое значение |
|---|---|---|
| Препарат раздавленная капля | Овальные дрожжевые клетки, почкование, псевдогифы | Быстрое первичное выявление Candida spp. в нативном биоматериале |
| Окраска по Граму | Грамположительные овальные клетки, иногда псевдогифы | Повышает контраст и облегчает микроскопию, особенно в клинических мазках |
| Окраска по Романовскому—Гимзе | Окрашенные клеточные элементы и дрожжеподобные формы | Может использоваться вспомогательно, но не является основным экспресс-методом для кандид |
| Метод Мак-Мануса (PAS) | Малиново-красное окрашивание полисахаридных структур клеточной стенки грибов | Особенно информативен в гистологическом материале при инвазивном кандидозе |
| Культуральное исследование | Рост кремовых колоний с последующей видовой идентификацией | Подтверждает жизнеспособность возбудителя и позволяет определить вид и чувствительность к антимикотикам |
| Молекулярная идентификация | Обнаружение видоспецифической ДНК или РНК | Используется для уточнения вида и диагностики при низкой микробной нагрузке или труднокультивируемых вариантах |
Положительный результат нативной микроскопии свидетельствует о наличии дрожжеподобных грибов, но его следует сопоставлять с жалобами, признаками воспаления и количеством выявленных клеток. Обнаружение псевдогиф или истинных гиф повышает вероятность активного инфекционного процесса по сравнению с единичными почкующимися клетками. Для видовой идентификации и выбора терапии необходимы культуральные либо молекулярные методы. При подозрении на инвазивный кандидоз решающее значение имеют исследование материала из стерильного очага и подтверждение системной инфекции.