2) эмиссионного спектрального анализа
3) рентгенфлюоресценции
4) метода цветных отпечатков
УФ-ВИД-спектрофотометрия пригодна для количественного определения барбитуратов благодаря способности их молекул поглощать электромагнитное излучение в ультрафиолетовой области. Барбитуратное кольцо содержит хромофорную систему, спектральные характеристики которой зависят от степени ионизации вещества и pH среды. Для ряда производных барбитуровой кислоты регистрируются характерные максимумы поглощения в УФ-диапазоне, что позволяет использовать оптическую плотность раствора как аналитический сигнал.
Количественная спектрофотометрия основана на законе Бугера–Ламберта–Бера: в пределах линейного диапазона оптическая плотность раствора пропорциональна концентрации поглощающего вещества при постоянной длине оптического пути и выбранной длине волны. Поэтому после выделения барбитурата из биологического материала и соответствующей пробоподготовки его концентрацию определяют по измеренной абсорбции с использованием градуировочной зависимости или стандартного раствора. Контроль pH имеет принципиальное значение, поскольку переход барбитуратов между неионизированной и ионизированной формами изменяет положение и интенсивность полос поглощения.
Остальные перечисленные подходы не являются рациональными методами количественного определения органических барбитуратов в судебно-химическом анализе. Эмиссионный спектральный анализ и рентгенофлуоресцентный анализ ориентированы преимущественно на элементный состав и не дают специфического количественного сигнала для молекулы барбитурата. Цветные реакции могут применяться как ориентировочные или предварительные пробы, однако уступают инструментальной спектрофотометрии по воспроизводимости и возможностям количественной оценки; в современной токсикологической практике идентификацию при необходимости дополняют хроматографическими и масс-спектрометрическими методами.
| Метод | Аналитический принцип | Применимость к барбитуратам |
|---|---|---|
| УФ-ВИД-спектрофотометрия | Измерение молекулярного поглощения при выбранной длине волны | Подходит для количественного определения после соответствующей пробоподготовки |
| Спектрофотометрия при контролируемом pH | Регистрация pH-зависимых изменений спектра ионизированных форм | Повышает воспроизводимость и аналитическую специфичность определения |
| ВЭЖХ с УФ-детектированием | Хроматографическое разделение с последующим измерением УФ-поглощения | Позволяет разделять отдельные барбитураты и проводить количественный анализ |
| ГХ-МС | Разделение компонентов и регистрация характерных масс-спектров | Высокоспецифичный подтверждающий метод идентификации и количественного анализа |
| Эмиссионный спектральный анализ | Регистрация излучения возбужденных атомов и ионов | Предназначен главным образом для элементного анализа, а не определения молекул барбитуратов |
| Рентгенофлуоресцентный анализ | Регистрация характеристического рентгеновского излучения элементов | Не обеспечивает необходимой молекулярной специфичности для барбитуратов |
| Цветные химические реакции | Образование окрашенного продукта при взаимодействии с реагентом | Преимущественно предварительный качественный или полуколичественный подход |
В судебно-химическом исследовании количественный результат должен оцениваться с учетом полноты изолирования вещества из биологической матрицы, возможных интерференций и условий измерения. Спектрофотометрический метод особенно чувствителен к правильному выбору длины волны, pH и состава растворителя. При исследовании сложных биологических объектов специфичность анализа повышают предварительным разделением компонентов или применением подтверждающих хромато-масс-спектрометрических методик. Таким образом, использование УФ-ВИД-спектрофотометрии основано на измеряемой зависимости интенсивности молекулярного поглощения барбитуратов от их концентрации.