2) изменению цвета лакмусовой бумажки
3) изменению цвета специального индикатора (+)
4) изменению оптической плотности в лунке панели
Большинство миниатюризированных тест-систем для видовой идентификации энтеробактерий основано на регистрации изменения цвета специального индикатора. После внесения стандартизированной бактериальной суспензии обезвоженные субстраты в лунках регидратируются. Утилизация углеводов, аминокислот, цитрата и других соединений изменяет pH среды либо приводит к образованию окрашенного продукта ферментативной реакции, что визуализируется кислотно-основным или хромогенным индикатором.
Совокупность положительных и отрицательных реакций формирует биохимический профиль изолята, который сопоставляют с базой данных тест-системы и получают числовой код или вероятностный результат идентификации. Простое помутнение отражает преимущественно рост микроорганизма и недостаточно специфично для определения вида, а лакмусовая бумага не является стандартным элементом отдельных микролунок. Измерение оптической плотности применяется в некоторых автоматизированных анализаторах, однако в большинстве классических биохимических панелей конечным регистрируемым признаком служит именно индикаторное изменение окраски.
| Диагностическая реакция | Исследуемое свойство | Типичный индикаторный признак | Дифференциальное значение |
|---|---|---|---|
| Ферментация углеводов | Образование кислых продуктов при метаболизме сахара | Изменение цвета pH-индикатора в кислую сторону | Различает виды по спектру утилизируемых углеводов |
| Уреазная активность | Расщепление мочевины с образованием аммиака | Ощелачивание среды и соответствующее изменение окраски | Характерна, в частности, для представителей родов Proteus, Morganella и Providencia |
| Декарбоксилирование аминокислот | Образование щелочных аминов | Переход индикатора к цвету щелочной реакции | Используется для оценки лизин-, орнитин- и аргинин-декарбоксилазной активности |
| Утилизация цитрата | Использование цитрата как единственного источника углерода | Ощелачивание и изменение цвета индикатора | Помогает дифференцировать Escherichia, Klebsiella, Enterobacter и близкие таксоны |
| Триптофан-дезаминазная реакция | Дезаминирование триптофана | Появление окрашенного комплекса после добавления реактива | Типична для группы Proteae |
| β-галактозидазная активность | Расщепление хромогенного субстрата ферментом | Появление окрашенного продукта | Выявляет ферментативную активность даже при замедленной ферментации лактозы |
| Образование сероводорода или индола | Метаболизм серосодержащих соединений либо триптофана | Появление темного осадка или окрашенного слоя после внесения реактива | Уточняет различия между фенотипически близкими энтеробактериями |
Надежность идентификации зависит от чистоты культуры, плотности инокулюма, температуры и продолжительности инкубации. Окраску каждой лунки оценивают строго в предусмотренный производителем срок, поскольку позднее считывание может приводить к ложной интерпретации. При низкой вероятности идентификации, атипичном биохимическом профиле или клинически значимом изоляте результат подтверждают дополнительными методами, включая MALDI-TOF масс-спектрометрию или молекулярно-генетические исследования.