2) специальные ингибиторные среды (+)
3) кровяной агар
4) среду Эндо или Левина
Для первичного выделения Pseudomonas aeruginosa применяют специальные селективно-ингибирующие среды, прежде всего цетримидный агар и среды типа Pseudomonas Isolation Agar. Цетримид — катионное поверхностно-активное вещество, подавляющее рост большинства сопутствующих микроорганизмов, тогда как синегнойная палочка благодаря особенностям клеточной оболочки сохраняет способность размножаться. Такой принцип повышает вероятность обнаружения возбудителя в материале, содержащем смешанную микрофлору.
На селективной среде колонии P. aeruginosa обычно крупные, гладкие или слегка шероховатые, с характерным фруктовым запахом. Диагностически значимы продукция пиоцианина, окрашивающего среду в сине-зелёный цвет, и пиовердина, придающего колониям желтовато-зелёную флуоресценцию в ультрафиолетовом свете. Однако пигментообразование может отсутствовать, поэтому окончательную идентификацию проводят с учётом оксидазной активности, морфологии грамотрицательных палочек, биохимического профиля, MALDI-TOF масс-спектрометрии или другого валидированного метода.
Простой и кровяной агары не обеспечивают достаточной селективности: на них растут как синегнойная палочка, так и многие представители сопутствующей флоры. Среды Эндо и Левина предназначены преимущественно для выделения и дифференциации грамотрицательных кишечных бактерий по ферментации лактозы; P. aeruginosa на них может расти как нелактозоферментирующий микроорганизм, но специфичность такого посева ниже.
| Среда или признак | Назначение | Ожидаемый результат при P. aeruginosa | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Цетримидный агар | Селективное выделение синегнойной палочки | Рост типичных колоний, возможна сине-зелёная пигментация | Основная ингибирующая среда для первичного посева |
| Pseudomonas Isolation Agar | Подавление сопутствующей микрофлоры и поддержка роста псевдомонад | Рост колоний с возможной продукцией пиоцианина и пиовердина | Повышает чувствительность выделения возбудителя из полимикробного материала |
| Среда Эндо или Левина | Дифференциация грамотрицательных бактерий, прежде всего энтеробактерий | Рост обычно бесцветных колоний как нелактозоферментирующего микроорганизма | Дополнительная, но не специфичная среда для P. aeruginosa |
| Кровяной агар | Универсальная питательная среда для оценки гемолиза и морфологии колоний | Возможен рост, иногда наблюдается β-гемолиз | Недостаточная селективность при наличии смешанной флоры |
| Простой агар | Общее культивирование неприхотливых бактерий | Возможен рост синегнойной палочки | Не обеспечивает избирательного выделения возбудителя |
| Оксидазная проба | Подтверждение принадлежности к неферментирующим грамотрицательным палочкам | Положительная реакция | Важный дифференциальный признак в сочетании с культуральными свойствами |
| Рост при 42 °C | Дополнительная фенотипическая дифференциация | Для типичных штаммов характерен рост | Используется как вспомогательный, а не единственный критерий идентификации |
Выбор ингибирующей среды особенно важен при исследовании мокроты, раневого отделяемого, ожогового материала и других образцов с богатой смешанной микрофлорой. Выделенную культуру нельзя идентифицировать только по цвету колоний или запаху, поскольку эти признаки вариабельны. Наиболее надёжно заключение основывается на совокупности селективного роста, морфологии, оксидазной реакции и подтверждающего метода идентификации. Количественную оценку роста проводят с учётом вида клинического материала и правил интерпретации его микробиологического исследования.