2) смесь минеральных кислот
3) смесь органических растворителей (+)
4) вода
Подвижная фаза в тонкослойной хроматографии представляет собой элюент — растворитель или систему растворителей, перемещающуюся по слою сорбента за счёт капиллярных сил. В фармацевтической химии и фармакогнозии чаще используют комбинации органических растворителей: например, углеводородного компонента с растворителем средней или высокой полярности. Такой состав позволяет целенаправленно изменять полярность элюента и разделять вещества растительного сырья, лекарственные субстанции и продукты их превращения.
Разделение основано на неодинаковом распределении компонентов смеси между неподвижной фазой, чаще всего силикагелем, и подвижной фазой. Силикагель удерживает полярные соединения за счёт адсорбции, а растворитель конкурирует с ними за активные центры сорбента и переносит вещества на различное расстояние. Эффективность системы оценивают по коэффициенту задержки Rf, который рассчитывают как отношение расстояния, пройденного веществом, к расстоянию фронта растворителя.
Состав элюента подбирают экспериментально или по фармакопейной методике с учётом природы анализируемых соединений и типа сорбента. Вода может входить в состав водно-органических систем, а кислоты, основания и соли иногда применяют как модификаторы для изменения ионизации веществ, однако самостоятельно они обычно не являются основой подвижной фазы. Поэтому наиболее типичным вариантом для классической ТСХ является смесь органических растворителей.
| Состав подвижной фазы | Основная функция | Влияние на хроматографирование | Типичное применение |
|---|---|---|---|
| Смесь неполярного и более полярного органического растворителя | Точная настройка элюирующей способности | Позволяет разделять соединения с близкими свойствами и регулировать значения Rf | Идентификация алкалоидов, флавоноидов, терпеноидов и других биологически активных веществ |
| Неполярные органические растворители | Перенос липофильных компонентов | Слабее элюируют полярные вещества, которые сильнее удерживаются силикагелем | Разделение углеводородов, стеринов, некоторых терпенов |
| Органический растворитель средней полярности | Повышение способности системы перемещать адсорбированные вещества | Увеличивает миграцию соединений средней полярности | Разделение фенольных соединений, агликонов, умеренно полярных лекарственных веществ |
| Полярный органический модификатор | Ослабление взаимодействия аналита с силикагелем | Повышает подвижность полярных соединений и предотвращает их чрезмерную задержку у линии старта | Хроматография гликозидов, аминов, органических кислот |
| Водно-органическая смесь | Одновременное элюирование полярных и менее полярных компонентов | Позволяет работать с гидрофильными веществами, сохраняя приемлемое разделение | Анализ сахаров, гликозидов, аминокислот и экстрактов лекарственного растительного сырья |
| Органическая система с кислотным или щелочным модификатором | Изменение степени ионизации аналита | Меняет сорбцию, форму пятен и воспроизводимость значений Rf | Разделение алкалоидов, аминов, карбоновых кислот |
| Вода или раствор неорганической соли без органического компонента | Элюирование преимущественно гидрофильных соединений | Используется ограниченно; часто обеспечивает недостаточную селективность или неудовлетворительное перемещение компонентов | Специализированные водные и ионные системы, а не стандартный вариант классической ТСХ |
После развития пластинки пятна визуализируют в ультрафиолетовом свете, в парах реагентов или после обработки специфическими проявителями. Для фармакопейной идентификации сопоставляют положение и окраску пятен исследуемого образца со стандартом. Надёжность результата зависит от точного состава элюента, насыщения хроматографической камеры, качества сорбента и соблюдения условий нанесения проб.