2) фильтров Шамберлена
3) ядерных фильтров (+)
4) фильтров глубинного типа
Правильный ответ — ядерные, или трековые, мембранные фильтры. Их изготавливают из тонкой поликарбонатной плёнки, в которой после воздействия заряженных частиц формируют практически одинаковые прямые цилиндрические поры. Благодаря строго заданному диаметру пор около 0,46–0,55 мкм фильтр обеспечивает поверхностное разделение микроорганизмов, а не их неопределённое задерживание в толще материала.
Принцип метода основан на морфологии и высокой подвижности кампилобактерий. Тонкие изогнутые клетки шириной приблизительно 0,2–0,8 мкм, снабжённые полярными жгутиками, активно проходят через поры к поверхности расположенного под фильтром агара, тогда как значительная часть более крупных и менее подвижных бактерий кишечной микробиоты остаётся на мембране. Таким образом, физическая селекция частично заменяет подавление сопутствующей флоры антибиотиками и позволяет быстрее получить изолированные колонии.
Отказ от селективных добавок расширяет спектр обнаруживаемых микроорганизмов рода Campylobacter и родственных таксонов. Антимикробные компоненты стандартных селективных сред могут угнетать не только фоновую флору, но и чувствительные, медленно растущие или нетермотолерантные виды; посев после фильтрации на обогащённый кровью неселективный агар уменьшает этот селективный сдвиг. Эффективность метода зависит от размера пор, состава среды и микроаэрофильной атмосферы: поликарбонатные мембраны с порами около 0,6 мкм в клинических исследованиях обеспечивали более высокую частоту выделения, чем мембраны с порами 0,45 мкм.
| Фильтр или подход | Структура и принцип действия | Значение для выделения кампилобактерий |
|---|---|---|
| Ядерный (трековый) фильтр | Тонкая поликарбонатная мембрана с прямыми порами близкого диаметра | Обеспечивает воспроизводимое прохождение тонких подвижных клеток и задерживает значительную часть сопутствующей микрофлоры |
| Поры 0,46–0,55 мкм | Размер сопоставим с поперечником клеток Campylobacter | Создаёт баланс между прохождением кампилобактерий и ограничением переноса более крупных бактерий |
| Неселективный кровяной агар | Питательная основа без ингибирующей комбинации антибиотиков | Поддерживает рост более широкого спектра видов, включая чувствительные и медленно растущие изоляты |
| Селективный агар | Подавляет фоновую флору антибиотиками и другими ингибиторами | Удобен для типичных C. jejuni и C. coli, но может снижать выявляемость менее устойчивых видов |
| Фильтр Зейтца | Толстый волокнистый материал с извилистыми каналами; действует как глубинный и адсорбционный фильтр | Не имеет строго калиброванных сквозных пор и способен необратимо задерживать клетки в толще материала |
| Фильтр Шамберлена | Пористая керамическая свеча, предназначенная преимущественно для удаления бактерий из жидкостей | Не приспособлен для кратковременного дифференциального прохождения кампилобактерий непосредственно на агар |
| Глубинный фильтр | Задерживает частицы во всём объёме неоднородной пористой матрицы | Характеризуется вариабельной эффективной пористостью, адсорбцией клеток и затруднённым переносом жизнеспособных бактерий на среду |
После удаления мембраны чашки инкубируют в микроаэрофильной атмосфере, обычно при 37–42 °C в зависимости от предполагаемого видового состава. Более низкая температура культивирования может быть предпочтительна при поиске нетермотолерантных и редких видов, тогда как 42 °C преимущественно поддерживает рост термотолерантных C. jejuni и C. coli. Полученные колонии идентифицируют с учётом морфологии, оксидазной активности, условий роста и видоспецифических методов, включая MALDI-TOF масс-спектрометрию или молекулярные тесты. Следует учитывать, что фильтрация зависит от подвижности клеток и при низкой концентрации возбудителя может применяться параллельно с обогащением или посевом на селективную среду.