2) окраску по Мак-Манусу
3) окраску эриохром черным
4) реакцию прямой иммунофлуоресценции (+)
Реакция прямой иммунофлуоресценции основана на связывании меченных флуорохромом моноклональных антител со специфическими антигенами Pneumocystis jirovecii. Образовавшиеся иммунные комплексы выявляют при люминесцентной микроскопии по характерному свечению цист и других морфологических форм возбудителя. Антиген-антительное взаимодействие обеспечивает значительно более высокую специфичность метода по сравнению с обычными гистохимическими окрасками, при которых микроорганизмы распознаются преимущественно по морфологии.
Диагностическая чувствительность исследования зависит от качества респираторного материала и интенсивности микробной нагрузки. Индуцированная мокрота пригодна для неинвазивной диагностики, однако при отрицательном результате и сохраняющемся клиническом подозрении предпочтительно исследование бронхоальвеолярного лаважа. Окраски, выявляющие полисахариды или отдельные структурные компоненты клеточной стенки, позволяют визуализировать цисты, но могут окрашивать другие грибы, клетки и тканевые элементы, поэтому уступают иммунофлуоресценции по этиологической специфичности.
| Метод | Диагностическая мишень | Основное преимущество | Ограничение |
|---|---|---|---|
| Прямая иммунофлуоресценция | Специфические антигены P. jirovecii | Высокая специфичность и наглядная идентификация возбудителя | Требует люминесцентного микроскопа и качественного материала |
| Окраска по Мак-Манусу, PAS-реакция | Полисахаридные компоненты стенки цист | Позволяет визуализировать грибковые структуры | Недостаточная видовая специфичность |
| Серебрение и импрегнационные методы | Контуры стенки цист | Хорошая морфологическая контрастность | Не выявляет возбудителя по специфическому антигену |
| Полимеразная цепная реакция | Фрагменты ДНК P. jirovecii | Очень высокая аналитическая чувствительность | Возможен положительный результат при колонизации без пневмонии |
| Микроскопия индуцированной мокроты | Цисты и трофические формы | Неинвазивное получение материала | Чувствительность ниже, чем при исследовании бронхоальвеолярного лаважа |
| Исследование бронхоальвеолярного лаважа | Возбудитель в материале из нижних дыхательных путей | Высокая диагностическая информативность | Инвазивность бронхоскопического забора |
Результат прямой иммунофлуоресценции следует оценивать совместно с клиническими проявлениями, данными компьютерной томографии и показателями оксигенации. Отрицательное исследование мокроты не исключает пневмоцистную пневмонию, особенно при низкой микробной нагрузке или недостаточном количестве материала. ПЦР повышает чувствительность диагностики, но требует разграничения активной инфекции и бессимптомной колонизации. Наиболее убедительным подтверждением заболевания является обнаружение возбудителя в материале из нижних дыхательных путей при наличии соответствующей клинико-рентгенологической картины.