2) 15
3) 5
4) 45
Правильный ответ — 30 минут. При определении наиболее вероятного числа (НВЧ) это предельный интервал между приготовлением последовательных разведений и внесением последнего из них в питательные среды. Соблюдение временного ограничения необходимо для сохранения исходной концентрации жизнеспособных микроорганизмов в каждом разведении.
Метод НВЧ основан на статистической оценке количества микроорганизмов по сочетанию положительных и отрицательных пробирок после инкубации. При задержке посева возможно размножение или гибель клеток, их оседание, агрегация и адсорбция на стенках посуды; в результате фактическая концентрация в разведении перестаёт соответствовать расчётной. Это приводит к систематической погрешности итогового показателя, поэтому 30 минут рассматриваются как верхняя допустимая граница, а не как рекомендуемая длительность ожидания.
Работу выполняют последовательно, без необоснованных пауз, с тщательным перемешиванием разведений перед отбором инокулюма. Превышение установленного интервала снижает достоверность количественного результата и при невозможности подтвердить соблюдение методики требует повторного исследования. Особенно важно контролировать время при анализе материалов с низкой концентрацией возбудителя, где даже небольшое изменение числа жизнеспособных клеток существенно влияет на статистическую оценку.
| Условие проведения | Состояние исследуемого материала | Значение для результата НВЧ |
|---|---|---|
| Посев сразу после приготовления разведений | Концентрация клеток соответствует расчётной степени разведения | Наиболее корректное распределение положительных и отрицательных пробирок |
| Интервал до 30 минут | Изменение численности и распределения микроорганизмов минимально при соблюдении методики | Результат считается полученным в допустимых условиях |
| Ровно 30 минут | Достигнута предельная граница, установленная для этапа посева | Посев допустим, но дальнейшее промедление недопустимо |
| Более 30 минут | Вероятны размножение, гибель, оседание или агрегация клеток | Нарушается соответствие между расчётным и фактическим разведением |
| Недостаточное перемешивание перед отбором | Микроорганизмы распределяются неравномерно | Возрастает случайная ошибка и искажается сочетание положительных пробирок |
| Инкубация после внесения материала | Жизнеспособные микроорганизмы размножаются в питательной среде | Регистрируется наличие роста, а не исходное число клеток прямым подсчётом |
| Расчёт по схеме НВЧ | Используется комбинация положительных пробирок в последовательных разведениях | Получают статистическую оценку концентрации микроорганизмов в исходной пробе |
Время отсчитывают от момента завершения приготовления разведений, а не от начала инкубации посевов. Все пробирки и чашки должны быть промаркированы заранее, чтобы сократить техническую паузу. Контроль времени является частью преаналитического этапа и напрямую влияет на воспроизводимость количественного бактериологического исследования. При нарушении этого этапа достоверность расчёта НВЧ не может считаться гарантированной.