2) обработка эфиром
3) охлаждение
4) центрифугирование (+)
Центрифугирование является методом механического обогащения исследуемого материала микобактериями. После разжижения и, при необходимости, деконтаминации мокроты более плотные частицы, включая микобактерии, концентрируются в осадке под действием центробежной силы. Использование осадка вместо исходного материала повышает вероятность обнаружения возбудителя при небольшой бактериальной нагрузке.
Полученный осадок применяют для приготовления мазков, окрашиваемых по Цилю–Нильсену или флуорохромными методами, а также для посева на плотные и жидкие питательные среды и проведения молекулярно-генетических тестов. В стандартных протоколах используют высокоскоростное центрифугирование, например около 3000 g в течение 15–20 минут, с обязательным соблюдением требований биологической безопасности. Таким образом, центрифугирование не уничтожает микобактерии и не изменяет их диагностические свойства, а физически увеличивает их концентрацию в рабочей фракции образца.
Термическое воздействие и охлаждение не обеспечивают направленного накопления микобактерий, а обработка химическими веществами может выполнять иные задачи — разжижение, деконтаминацию или подавление сопутствующей микрофлоры. Поэтому в данном контексте правильным считается именно метод осаждения и концентрации возбудителя центрифугированием.
| Этап или метод | Основной принцип | Диагностическое значение | Основное ограничение |
|---|---|---|---|
| Разжижение материала | Разрушение слизистых компонентов и высвобождение микобактерий | Повышает однородность образца и эффективность последующей обработки | Само по себе не концентрирует возбудителя |
| Деконтаминация | Подавление сопутствующей бактериальной и грибковой флоры | Повышает информативность посева на микобактерии | Чрезмерное воздействие реагентов может снизить жизнеспособность микобактерий |
| Центрифугирование | Осаждение микобактерий и других плотных компонентов в придонную фракцию | Метод обогащения; увеличивает вероятность микроскопического, культурального и молекулярного выявления | Требует валидированного режима и герметичной работы с инфекционным материалом |
| Микроскопия мазка | Выявление кислотоустойчивых или флуорохром-положительных палочек | Быстрый ориентировочный результат и оценка бактериовыделения | Чувствительность ниже при малом количестве микобактерий; видовая идентификация ограничена |
| Культуральное исследование | Размножение жизнеспособных микобактерий на плотных или жидких средах | Подтверждение жизнеспособности возбудителя и получение культуры для тестирования лекарственной чувствительности | Результат требует значительного времени |
| Молекулярно-генетическое выявление | Амплификация специфических последовательностей ДНК микобактерий | Быстрое обнаружение комплекса Mycobacterium tuberculosis и отдельных генов устойчивости | Не всегда позволяет оценить жизнеспособность возбудителя |
Эффективность центрифугирования особенно важна при малом количестве микобактерий в клиническом образце. Результаты микроскопии следует интерпретировать с учетом клинических данных, качества материала и применения деконтаминации. Отрицательный мазок не исключает туберкулез и требует культурального или молекулярного исследования. При положительном результате необходимо обеспечить видовую идентификацию и, по показаниям, определить лекарственную устойчивость.Учебный курс: тесты с ответами по бактериологии.