2) Цилю – Нильсену (+)
3) Нейссеру
4) Леффлеру
Окраска по Цилю—Нильсену основана на выявлении кислотоустойчивости бактерий, которая определяется особенностями клеточной стенки. У микобактерий она содержит большое количество липидов, прежде всего миколовых кислот, формирующих плотный гидрофобный слой. После окрашивания карболовым фуксином этот краситель прочно удерживается в клеточной стенке и не удаляется при обработке кислотой или кислотно-спиртовым раствором.
При положительной реакции кислотоустойчивые бактерии выявляются в виде красных или розово-красных палочек на синем фоне докраски метиленовым синим. Метод применяют прежде всего для обнаружения микобактерий в мокроте и другом клиническом материале, включая возбудителя туберкулёза. Однако результат свидетельствует о наличии кислотоустойчивых микроорганизмов, но не позволяет достоверно определить вид, поэтому для видовой идентификации необходимы культуральные, молекулярно-генетические или иммунологические методы.
Окраска по Романовскому—Гимзе, Нейссеру и Леффлеру используется для изучения общей морфологии бактерий, выявления внутриклеточных структур или метахроматических гранул и не основана на устойчивости клеточной стенки к кислотам. Поэтому именно метод Циля—Нильсена является принципиальным дифференциальным тестом для микроорганизмов с липид-богатой, устойчивой к обесцвечиванию клеточной стенкой.
| Метод | Основной объект или признак | Диагностическое проявление |
|---|---|---|
| Циля—Нильсена | Кислотоустойчивость, обусловленная высоким содержанием миколовых кислот | Красные палочки после обработки кислотой на синем фоне; характерно для микобактерий |
| Модифицированная окраска Циля—Нильсена | Частичная кислотоустойчивость | Может применяться для выявления некоторых видов Nocardia и ооцист Cryptosporidium |
| Ауромин-родаминовая окраска | Флуорохромное выявление кислотоустойчивых бактерий | Микобактерии светятся жёлто-зелёным цветом в люминесцентном микроскопе; метод более чувствителен при скрининге |
| Романовского—Гимзы | Морфология клеток, внутриклеточная локализация, некоторые простейшие | Дифференциальная окраска структур цитоплазмы и ядра; кислотоустойчивость не оценивается |
| Нейссера | Метахроматические волютиновые гранулы | Выявление гранул у коринебактерий; клетки и гранулы окрашиваются контрастно |
| Леффлера | Упрощённая окраска метиленовым синим | Общее выявление формы и расположения бактерий, включая коринебактерии; специфичность для микобактерий отсутствует |
| Окраска по Граму | Различия пептидогликанового слоя клеточной стенки | Разделение на грамположительные и грамотрицательные бактерии; микобактерии окрашиваются плохо или неравномерно |
Кислотоустойчивость является важным фенотипическим критерием при первичном обнаружении микобактерий в клиническом материале. Отрицательный результат микроскопии не исключает туберкулёз, особенно при низкой бактериальной нагрузке, поэтому исследование нередко повторяют и дополняют ПЦР или посевом. Для повышения достоверности мазки окрашивают с обязательным контролем качества реагентов и соблюдением этапов фиксации, окрашивания и обесцвечивания. Интерпретация результата проводится вместе с клиническими, рентгенологическими и лабораторными данными.