2) титрования по Грациа
3) Аппельмана
4) Отто
Метод серийных разведений является количественным способом определения антибиотикочувствительности бактерий. Исследуемый антибиотик последовательно разводят в жидкой питательной среде или вносят в агар в различных концентрациях, после чего добавляют стандартизованную бактериальную суспензию. После инкубации оценивают наличие или отсутствие видимого роста: минимальная подавляющая концентрация (МПК, MIC) — наименьшая концентрация препарата, полностью ингибирующая видимое размножение бактерий.
Полученное значение МПК сопоставляют с клиническими пограничными значениями, установленными актуальными стандартами EUCAST или CLSI, и классифицируют изолят как чувствительный, чувствительный при увеличенной экспозиции либо резистентный. При необходимости из пробирок или лунок без видимого роста выполняют пересев на питательный агар; наименьшая концентрация, приводящая к гибели 99,9% исходной бактериальной популяции, определяется как минимальная бактерицидная концентрация (МБК, MBC). Метод особенно важен для оценки действия препаратов, для которых диско-диффузионный тест недостаточно информативен, а также при тяжелых инфекциях и подозрении на выраженную лекарственную устойчивость.
Титрование по Грациа, методы Аппельмана и Отто относятся к методам оценки активности бактериофагов или связанных с фаголизисом реакций, а не к стандартному определению чувствительности бактерий к антибиотикам. Поэтому именно серийные разведения позволяют непосредственно установить количественный показатель взаимодействия антибактериального препарата с конкретным изолятом и обоснованно выбрать эффективный диапазон концентраций.
| Метод | Объект и принцип | Основной результат | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Серийные разведения | Посев стандартизованной бактериальной суспензии в ряд концентраций антибиотика в бульоне или агаре | МПК; при пересеве из прозрачных пробирок — МБК | Количественное определение чувствительности и последующая интерпретация по клиническим breakpoint |
| Диско-диффузионный метод | Диффузия антибиотика из диска в агар с равномерно засеянной культурой | Диаметр зоны задержки роста | Рутинное качественное или категориальное отнесение изолята к чувствительному, промежуточному/чувствительному при увеличенной экспозиции или резистентному |
| Градиентно-диффузионный метод | Полоска с градиентом концентраций антибиотика на поверхности засеянного агара | МПК в точке пересечения эллипса подавления роста с градиентом | Удобен для получения МПК отдельных препаратов, но требует контроля условий постановки |
| Автоматизированные системы | Регистрация роста бактерий в лунках с различными концентрациями препаратов по оптическим или другим физическим сигналам | МПК и категория чувствительности | Стандартизация и ускорение исследования при обязательном применении валидированных картриджей и контроля качества |
| Титрование по Грациа | Оценка литического действия бактериофага на газоне чувствительной культуры | Фаговый титр, число зон или бляшек лизиса | Характеризует активность бактериофага, а не чувствительность бактерии к антибиотику |
| Метод Аппельмана | Определение взаимодействия бактериофага с чувствительной бактериальной культурой в системе разведений | Показатель фаголитической активности | Применяется в фагодиагностике и фаготипировании, не заменяет антибиотикограмму |
| Метод Отто | Оценка реакции культуры на бактериофаг или продуктов фаголизиса | Признак фагоспецифического лизиса | Относится к фагологическим методам, а не к определению МПК антибактериального препарата |
Для достоверности метода необходимы чистая идентифицированная культура, стандартизованная плотность инокулюма и контрольные штаммы с известными диапазонами МПК. Результаты нельзя интерпретировать только по факту отсутствия роста без учета примененного стандарта и клинических breakpoint. На итоговую оценку также влияют состав среды, инкубационная атмосфера, температура и длительность инкубации. Полученная антибиотикограмма должна рассматриваться вместе с локализацией инфекции, фармакокинетикой препарата и вероятностью достижения эффективной концентрации в очаге.