2) в полевых условиях
3) в зимнее время года
4) недостаточного объема воды
Титрационный метод, или метод многотрубочных посевов, применяют при исследовании воды с большим количеством взвешенных веществ. Исследуемую пробу последовательно разводят и вносят в несколько пробирок с жидкой элективной или дифференциально-диагностической средой. После инкубации учитывают признаки роста и ферментации лактозы с образованием кислоты и газа, а наличие E. coli подтверждают пересевом на селективно-дифференциальные среды и биохимическими тестами.
Высокая мутность и взвешенные частицы затрудняют мембранную фильтрацию: фильтр быстро забивается, нарушается прохождение заданного объёма воды, а посторонняя микрофлора и частицы могут мешать подсчёту колоний. При титрационном подходе вода не пропускается через мембрану, поэтому её механическая загрязнённость не препятствует внесению материала в питательную среду. Количество бактерий оценивают статистически по числу положительных пробирок и соответствующей величине наиболее вероятного числа (МЧЧ, MPN) либо рассчитывают коли-титр — наименьший объём воды, содержащий одну клетку кишечной палочки.
Таким образом, именно выраженная взвешенность является показанием к выбору жидкостного многотрубочного метода вместо мембранно-фильтрационного. Метод требует соблюдения асептики, правильного приготовления разведений и подтверждения видовой принадлежности изолята, поскольку ферментация лактозы сама по себе не является абсолютным признаком E. coli.
| Подход | Принцип | Основной результат | Особенности применения |
|---|---|---|---|
| Титрационный, многотрубочный | Посев нескольких объёмов или разведений воды в жидкие питательные среды | МЧЧ/MPN или коли-титр | Предпочтителен при мутности и большом содержании взвешенных веществ |
| Мембранная фильтрация | Пропускание определённого объёма воды через мембрану с последующей инкубацией фильтра | Число колониеобразующих единиц в стандартном объёме | Эффективна для относительно прозрачной воды; фильтр может забиваться взвесью |
| Первичный скрининг на колиформные бактерии | Выявление роста и ферментации лактозосодержащей среды | Положительная или отрицательная проба | Не заменяет подтверждение видовой принадлежности микроорганизма |
| Подтверждение E. coli | Пересев подозрительной культуры и оценка культуральных, биохимических или ферментативных признаков | Подтверждённое наличие или отсутствие E. coli | Необходимо дифференцировать от других лактозоположительных энтеробактерий |
| Коли-титр | Определение минимального объёма воды, в котором обнаруживается одна клетка-индикатор | Объём воды, характеризующий степень фекального загрязнения | Чем меньше коли-титр, тем выше предполагаемая загрязнённость |
| Коли-индекс | Пересчёт количества бактерий-индикаторов на стандартизированный объём воды | Число клеток в установленном объёме, обычно в 1 л | Удобен для санитарно-гигиенической оценки и сравнения проб |
| Интерпретация результата | Сопоставление выявленного уровня E. coli с нормативами качества питьевой воды | Соответствие или несоответствие санитарным требованиям | Обнаружение E. coli указывает на возможное свежее фекальное загрязнение и эпидемиологический риск |
Титрационный метод особенно полезен, когда физические свойства пробы делают фильтрацию технически ненадёжной. Его результат зависит от объёма посеянной воды, числа повторностей и корректности статистического расчёта. Выявление E. coli рассматривается как санитарно-показательный признак фекального загрязнения и требует оценки безопасности воды в совокупности с другими микробиологическими показателями.