2) посев материала от больного на питательные среды
3) накопление чистой культуры
4) идентификацию чистой культуры (+)
На третьем этапе бактериологического исследования проводят идентификацию выделенной чистой культуры сальмонелл. К этому моменту из исследуемого материала уже получают изолированные колонии и подтверждают их чистоту пересевом; дальнейшая задача заключается в установлении таксономической принадлежности микроорганизма до рода и вида, а при необходимости — до серовара.
Идентификация включает оценку морфологии и культуральных свойств, окраску по Граму, биохимические тесты и серологическое типирование. Для Salmonella характерны грамотрицательные палочки семейства Enterobacterales, обычно не ферментирующие лактозу, образующие сероводород на соответствующих средах и обладающие специфическими соматическими O- и жгутиковыми H-антигенами. Реакции агглютинации с диагностическими сыворотками позволяют подтвердить принадлежность изолята к сальмонеллам и определить его антигенную формулу.
Посев первичного материала и этап накопления либо выделения чистой культуры относятся к предшествующим стадиям исследования. Определение чувствительности к антибиотикам выполняют после видовой идентификации, поскольку выбор панели препаратов и интерпретация результата требуют знания возбудителя; эти данные используются для коррекции терапии и эпидемиологического мониторинга.
| Этап исследования | Основное действие | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Первичный посев | Внесение материала от пациента на элективные, селективные и дифференциально-диагностические среды | Создание условий для обнаружения и предварительного выделения предполагаемого возбудителя |
| Накопление возбудителя | Инкубация в средах обогащения, повышающих концентрацию сальмонелл | Увеличение вероятности выделения бактерий при низкой обсеменённости материала |
| Отбор подозрительных колоний | Оценка размера, формы, цвета, прозрачности и других культуральных признаков колоний | Выбор колоний, наиболее вероятно принадлежащих к Salmonella, для дальнейшего пересева |
| Получение чистой культуры | Пересев отдельной колонии с контролем однородности роста | Исключение смешанной микрофлоры и получение изолята, пригодного для достоверной идентификации |
| Идентификация чистой культуры | Комплекс биохимических реакций, микроскопия и серологическая агглютинация с O- и H-сыворотками | Подтверждение рода и вида Salmonella, а при необходимости — серовара |
| Определение антибиотикочувствительности | Исследование чувствительности подтверждённого изолята диско-диффузионным или иным стандартизованным методом | Выбор рациональной антибактериальной терапии и выявление устойчивых штаммов; обычно выполняется после идентификации |
Таким образом, третья стадия направлена не на первичное обнаружение бактерии, а на установление её видовой и антигенной принадлежности. Диагностически значимым является сочетание культуральных, биохимических и серологических признаков, поскольку отдельный тест не всегда обеспечивает достоверное подтверждение. Выделенный изолят должен быть сохранён для последующего определения чувствительности к антибиотикам и, при необходимости, углублённого эпидемиологического типирования.