2) капсулу
3) споры
4) жгутики
Окраска по Леффлеру — это метиленово-синяя окраска, применяемая для выявления у Corynebacterium diphtheriae метахроматических гранул волютина, или гранул Бабеша—Эрнста. Они располагаются преимущественно на полюсах клетки, окрашиваются в тёмно-синий или фиолетовый цвет на фоне более светло окрашенной цитоплазмы и представлены внутриклеточными включениями полифосфатов. Метахромазия обусловлена изменением спектральных свойств красителя при его связывании с высокополимерными полифосфатами.
Выявление полярных гранул в сочетании с характерной морфологией дифтерийных коринебактерий — булавовидной формой, выраженным полиморфизмом и расположением в виде китайских иероглифов или под углом друг к другу — поддерживает диагноз дифтерии. Однако этот признак не является абсолютно специфичным: гранулы волютина могут встречаться и у других представителей рода Corynebacterium. Поэтому окончательная идентификация возбудителя требует культурального исследования, видовой биохимической идентификации и подтверждения токсигенности.
| Признак | Характеристика | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Гранулы волютина | Полифосфатные внутриклеточные включения, обычно расположенные на полюсах клетки | При окраске по Леффлеру приобретают тёмно-синюю или фиолетовую окраску вследствие метахромазии |
| Морфология C. diphtheriae | Грамположительные булавовидные палочки, часто полиморфные | Помогает предположить принадлежность к коринебактериям в мазке |
| Взаимное расположение клеток | Китайские иероглифы , V-, L-образные и угловые скопления | Характерный ориентировочный признак при микроскопии |
| Окраска по Нейссеру или Альберту | Специальные методы выявления метахроматических гранул | Могут использоваться для дополнительного подтверждения полярных включений |
| Капсула | Наружный слизистый слой, не являющийся основным объектом окраски по Леффлеру | Для выявления применяют специальные капсульные методы окраски |
| Токсигенность | Способность штамма продуцировать дифтерийный токсин | Определяется отдельно методом ПЦР, иммунологическим или биологическим тестом; одних гранул волютина недостаточно |
Гранулы Бабеша—Эрнста являются важным микроскопическим маркером коринебактерий, но не заменяют подтверждение токсигенности. Дифтерийный токсин кодируется геном tox, который связан с лизогенной конверсией бактериофагом. Клинически значимым считается сочетание обнаружения токсигенного штамма с соответствующей клинической картиной и эпидемиологическими данными.