2) иммуноферментном анализе (+)
3) реакции преципитации
4) биопробе
Иммуноферментный анализ позволяет не только обнаружить стафилококковый энтеротоксин, но и определить его серологический тип. Метод основан на специфическом взаимодействии растворимого токсина с антителами, распознающими антигенные детерминанты конкретного энтеротоксина, например SEA, SEB, SEC, SED или SEE. В сэндвич -варианте ИФА токсин связывается с иммобилизованными антителами, а затем выявляется вторыми антителами с ферментной меткой; интенсивность окрашивания после добавления субстрата отражает наличие и, при количественном исследовании, концентрацию антигена.
Типирование обеспечивается применением моноспецифических антител или отдельных тест-систем для различных энтеротоксинов. ИФА обладает высокой аналитической чувствительностью, поэтому подходит для исследования пищевых продуктов, культуральных фильтратов и других материалов, содержащих небольшое количество токсина. Определяется именно белковый продукт, что подтверждает присутствие энтеротоксина, тогда как выявление соответствующего гена методом ПЦР свидетельствует лишь о потенциальной способности штамма к токсинопродукции.
Агглютинация преимущественно используется для выявления корпускулярных антигенов или частиц, несущих антиген, и без специальных носителей малопригодна для прямого определения растворимого энтеротоксина. Реакция преципитации также основана на взаимодействии растворимого антигена с антителами, но обычно уступает ИФА по чувствительности и объективности регистрации результата. Биологическая проба может подтвердить токсическое действие образца, однако не обеспечивает надежного серологического типирования и имеет существенные ограничения, связанные со стандартизацией, специфичностью и биоэтикой.
| Метод | Определяемый объект | Возможность типирования | Диагностическое значение и ограничения |
|---|---|---|---|
| Иммуноферментный анализ | Белок энтеротоксина | Высокая при использовании типоспецифических антител | Чувствительное и объективно регистрируемое выявление токсина в исследуемом материале |
| Латекс-агглютинация | Антиген, связанный с сенсибилизированными частицами | Возможна только в специально разработанных тест-системах | Быстрый метод, но его результат зависит от качества носителя и специфичности реагентов |
| Реакция преципитации | Растворимый токсин и соответствующие антитела | Возможна при наличии моноспецифических сывороток | Менее чувствительна, требует достаточной концентрации антигена и визуальной оценки преципитата |
| Иммуноблоттинг | Белок с определенной молекулярной массой | Возможна с типоспецифическими антителами | Применяется как подтверждающий метод, но технически сложнее ИФА |
| ПЦР | Гены энтеротоксинов | Высокая генотипическая специфичность | Не доказывает экспрессию гена и фактическое присутствие токсина в продукте |
| Биологическая проба | Функциональная токсическая активность | Ограниченная | Не позволяет надежно различать антигенные типы; плохо стандартизируется и ограничена этическими требованиями |
Стафилококковая пищевая интоксикация развивается после употребления уже накопившегося в продукте энтеротоксина, поэтому инкубационный период обычно короткий. Наиболее характерны внезапная тошнота, многократная рвота, спастическая боль в животе и возможная диарея при отсутствии выраженной лихорадки. Энтеротоксины относительно устойчивы к нагреванию, поэтому термическая обработка, уничтожившая бактерии, не всегда обезвреживает сформировавшийся токсин. Лабораторное обнаружение конкретного энтеротоксина методом ИФА помогает подтвердить этиологию вспышки и установить связь с зараженным пищевым продуктом.