2) 45-60 мин инкубации и в течение 2-3ч
3) 18-24 ч инкубации и в течение 24-72 ч
4) 4-5 ч инкубации и в течение 18-24 ч (+)
Тест-системы для идентификации энтеробактерий по срокам учета результатов подразделяют на ускоренные, дающие предварительный профиль через 4–5 часов инкубации, и стандартные, требующие регистрации реакций в течение 18–24 часов. Такой диапазон связан с необходимостью накопления достаточной бактериальной массы и развития метаболических реакций в миниатюризированных питательных средах. Поэтому более короткие сроки в 45–60 минут обычно недостаточны для надежной оценки большинства биохимических признаков.
В основе исследования лежит выявление видоспецифического набора свойств: ферментации углеводов с образованием кислоты и газа, продукции индола, сероводорода, активности уреазы и декарбоксилаз, утилизации цитрата и других субстратов. В ускоренных системах применяются высокочувствительные индикаторы, хромогенные или флуорогенные субстраты, позволяющие раньше зарегистрировать изменение метаболизма. В стандартных панелях реакции протекают медленнее и требуют более длительной инкубации, после чего полученный биохимический профиль сопоставляют с базой данных или определителем.
Правильность ответа определяется именно сочетанием двух временных режимов: 4–5 часов для ускоренной идентификации и 18–24 часов для классических тест-систем. Период 24–72 часа не является типичным сроком учета результатов уже готовой идентификационной панели, поскольку он чаще относится к выделению и накоплению чистой культуры. Исследование проводят из изолированной колонии с контролем чистоты культуры, так как смешанный рост может сформировать ложный биохимический профиль.
| Группа тест-систем | Срок учета | Основной принцип | Тип регистрируемых признаков | Особенности интерпретации |
|---|---|---|---|---|
| Ускоренные панели | После 4–5 часов инкубации | Интенсивное выявление ранних метаболических реакций | Изменение pH, флуоресценция или окрашивание субстрата, ферментативная активность | Позволяют быстро получить предварительную видовую идентификацию |
| Стандартные миниатюризированные системы | В течение 18–24 часов | Рост культуры и накопление продуктов биохимических реакций | Ферментация углеводов, уреаза, индол, цитрат, H2S, декарбоксилазы | Формируют более полный биохимический профиль |
| Тесты на ферментацию углеводов | Чаще требуют длительной инкубации | Образование органических кислот и газа при расщеплении субстрата | Изменение цвета индикатора, разрыв или подъем поплавка | Используются для дифференциации родов и видов энтеробактерий |
| Тесты на ферменты и утилизацию соединений | От нескольких часов до суток | Выявление активности уреазы, триптофаназы, декарбоксилаз и способности использовать цитрат | Окрашивание среды, помутнение, образование осадка или газа | Оцениваются в совокупности, а не по одному признаку |
| Требование к материалу | До начала инкубации | Использование чистой изолированной колонии | Однородность морфологии и типичный рост на плотной среде | Смешанная культура снижает достоверность идентификации |
| Критерий окончательного заключения | После завершения предусмотренного протоколом времени | Сопоставление совокупности реакций с эталонным профилем | Процент вероятности или индекс соответствия виду | При низкой достоверности необходимы дополнительные тесты |
Результат тест-системы следует рассматривать в связи с морфологией колоний, окраской по Граму и исходными биохимическими признаками культуры. При атипичном профиле или несоответствии клиническим данным проводят повторную идентификацию, используют дополнительные реакции, MALDI-TOF-масс-спектрометрию или молекулярные методы. Ускоренный режим сокращает время ответа, но не отменяет контроля качества посева и оценки достоверности полученного профиля. Именно поэтому классификация по срокам 4–5 и 18–24 часа имеет практическое значение для организации лабораторной диагностики.