2) наличию внехромосомных носителей генетической информации
3) метаболитам, выделяемым ими в процессе жизнедеятельности (+)
4) газам, выделяемым ими в процессе жизнедеятельности
Газовая хроматография позволяет выявлять микроорганизмы по характерному спектру низкомолекулярных продуктов их метаболизма. К таким соединениям относятся летучие жирные кислоты, спирты, альдегиды, кетоны и другие вещества, образующиеся при ферментации субстратов. Набор и количественное соотношение этих метаболитов зависят от ферментативных систем микроорганизма, поэтому могут использоваться как своеобразный биохимический профиль.
Исследуемые соединения переводят в газовую фазу и разделяют в хроматографической колонке в зависимости от их летучести и взаимодействия с неподвижной фазой. Каждый компонент характеризуется определённым временем удерживания, а интенсивность сигнала детектора отражает его концентрацию. Метод особенно полезен для ориентировочной идентификации анаэробных бактерий по спектру короткоцепочечных жирных кислот, однако результат обычно оценивают вместе с данными посева, биохимической идентификации или молекулярно-генетического исследования.
| Диагностический подход | Определяемый признак | Основное значение |
|---|---|---|
| Газовая хроматография | Летучие и низкомолекулярные метаболиты микроорганизмов | Формирование метаболического профиля и ориентировочная идентификация |
| Культуральный метод | Рост жизнеспособных микроорганизмов на питательных средах | Получение чистой культуры и определение чувствительности к антимикробным препаратам |
| Классические биохимические тесты | Ферментативная активность и способность утилизировать субстраты | Видовая идентификация выделенной культуры |
| Масс-спектрометрия MALDI-TOF | Характерный спектр клеточных белков | Быстрая идентификация микроорганизма по базе эталонных спектров |
| ПЦР | Специфические последовательности ДНК или РНК | Высокочувствительное обнаружение возбудителя, включая трудно культивируемые формы |
| Микроскопия | Морфология, тинкториальные свойства и взаимное расположение клеток | Быстрая предварительная оценка состава исследуемого материала |
Газовая хроматография не ограничивается регистрацией веществ, физически являющихся газами при обычных условиях: принципиально важна возможность перевести анализируемые метаболиты в парообразное состояние. Поэтому объектом детекции служат продукты обмена, а не структурные компоненты микробной клетки или внехромосомная ДНК. Специфичность исследования повышается при использовании хромато-масс-спектрометрии, позволяющей дополнительно определять молекулярную структуру соединений. Диагностическое заключение должно учитывать условия культивирования и состав клинического материала, поскольку они способны изменять метаболический профиль.