2) ферментированными
3) растворимыми
4) адсорбированными
К серологическим реакциям третьего поколения относят методы, в которых иммунный комплекс выявляют с помощью специально меченого компонента. Меткой может служить флуорохром, фермент, радиоизотоп или хемилюминесцентная система; она присоединяется к антигену, антителу либо антииммуноглобулину. После специфического связывания антигена с антителом регистрируют сигнал метки, интенсивность которого связана с количеством образовавшегося иммунного комплекса.
К этой группе относятся иммунофлуоресцентный анализ, иммуноферментный анализ, радиоиммунный и хемилюминесцентный анализы. Ферментная метка является только одним из вариантов мечения, поэтому формулировка ферментированные компоненты не охватывает все реакции третьего поколения. Растворимость и адсорбция характеризуют физическое состояние или способ фиксации реагентов, но не являются основным классификационным признаком данной группы.
Использование метки повышает чувствительность и позволяет регистрировать реакцию инструментально, в том числе при концентрациях антигена или антитела, недостаточных для визуального образования осадка или агглютината. В зависимости от схемы постановки применяют прямой, непрямой, сэндвич — или конкурентный вариант анализа. Поэтому правильный ответ определяется именно наличием меченого иммунологического реагента.
| Поколение и метод | Основной реагент | Способ регистрации | Диагностическая особенность |
|---|---|---|---|
| Первое поколение: реакция агглютинации | Немеченые антитела и корпускулярный антиген | Визуальное образование агглютинатов | Проста в выполнении, но обычно менее чувствительна |
| Первое поколение: реакция преципитации | Растворимые антиген и антитело | Формирование видимого преципитата | Требует оптимального соотношения компонентов и достаточной их концентрации |
| Второе поколение: латекс-агглютинация или пассивная гемагглютинация | Антиген или антитело, адсорбированное на частице-носителе | Агглютинация частиц | Носитель усиливает визуальный эффект, но метка как обязательный элемент отсутствует |
| Третье поколение: иммунофлуоресцентный анализ | Антитело или антиген, меченный флуорохромом | Флуоресценция при микроскопии или в анализаторе | Позволяет выявлять антиген в клетках, тканях или клиническом материале |
| Третье поколение: иммуноферментный анализ | Конъюгат антитела или антигена с ферментом | Окрашивание субстрата с фотометрическим измерением | Применяется для определения антител, антигенов и гормонов |
| Третье поколение: радиоиммунный анализ | Реагент, меченный радионуклидом | Регистрация радиоактивности | Обеспечивает высокую чувствительность, но требует радиационной безопасности |
| Третье поколение: хемилюминесцентный анализ | Хемилюминесцентная метка или ферментная система | Измерение интенсивности светового сигнала | Характеризуется высокой чувствительностью и автоматизацией исследования |
Результат реакции третьего поколения оценивают по калибровочной кривой, пороговому значению или соотношению сигнал/фон. Обязательны соответствующие положительные, отрицательные и калибровочные контроли, поскольку неспецифическое связывание может приводить к ложноположительным результатам. При диагностике инфекций серологические данные сопоставляют с клинической картиной, сроками заболевания и, при необходимости, результатами исследования парных сывороток. Динамика титра антител и определение классов иммуноглобулинов помогают отличать текущую инфекцию от ранее перенесённой или поствакцинального иммунитета.