2) кардиолипином
3) цистеином
4) лакмусом
При идентификации возбудителей газовой гангрены оценивают не только анаэробные культуральные и морфологические признаки, но и профиль токсигенности. Реакция с лецитовителлином выявляет лецитиназную активность: α-токсин Clostridium perfringens, являющийся фосфолипазой C, гидролизует компоненты яичного желтка. В результате вокруг колонии на желточном агаре образуются опалесценция и мутная зона; такая реакция особенно характерна для C. perfringens, наиболее частого возбудителя газовой гангрены.
Фосфолипаза C повреждает фосфолипиды клеточных мембран, что приводит к гемолизу, некрозу мышечной ткани, сосудистым нарушениям и выраженному отёку. В классическом варианте реакции Наглера лецитиназный эффект подтверждают его нейтрализацией специфической антитоксической сывороткой: на участке среды с антитоксином помутнение отсутствует или значительно уменьшается. Поэтому положительная реакция с лецитовителлином служит важным фенотипическим критерием продукции видоспецифического α-токсина.
Летальность токсина для белых мышей и дерматонекротический тест на морских свинках также характеризуют биологическую активность токсинов, однако требуют комплексной интерпретации вместе с результатами посева и микроскопии. Кардиолипин не является субстратом для выявления лецитиназы, цистеин используют преимущественно как восстановитель в средах для анаэробов, а лакмус служит индикатором кислотно-щелочных изменений и не подтверждает специфическую токсигенность.
| Диагностический признак или метод | Что выявляет | Типичный результат | Значение для идентификации |
|---|---|---|---|
| Реакция с лецитовителлином | Лецитиназную активность, связанную с фосфолипазой C | Опалесценция или помутнение среды вокруг колонии | Характерный признак прежде всего C. perfringens |
| Реакция Наглера | Специфичность лецитиназного эффекта | Угнетение помутнения в присутствии антитоксина к α-токсину | Подтверждает ферментативную активность токсина и её иммунологическую специфичность |
| Реакция нейтрализации на белых мышах | Летальные свойства токсина | Защита животных соответствующей антитоксической сывороткой | Используется для оценки токсина, но не должна рассматриваться как единственный видовой критерий |
| Дерматонекротический тест на морских свинках | Наличие некротизирующих компонентов токсина | Локальная гиперемия, инфильтрация и некроз в месте введения | Дополняет характеристику токсигенности возбудителя |
| Другие возбудители газовой гангрены | Комплекс токсинов и ферментов C. novyi, C. septicum, C. histolyticum | Различающиеся профили гемолиза, протеолиза, некроза и культуральных свойств | Требуют совокупной оценки признаков; одна лецитиназная реакция не заменяет полную идентификацию |
| Кардиолипин, цистеин, лакмус | Серологические, восстановительные или индикаторные свойства среды | Не формируют специфического лецитиназного фенотипа | Не являются правильными критериями подтверждения продукции α-токсина |
Таким образом, положительная реакция с лецитовителлином указывает на продукцию лецитиназы и является ключевым классическим признаком C. perfringens. Окончательное заключение формируют с учётом анаэробного культивирования, микроскопии и других тестов токсигенности. В современной лаборатории идентификацию дополнительно подтверждают MALDI-TOF масс-спектрометрией и ПЦР-определением генов токсинов, включая ген фосфолипазы C. Получение результата имеет клиническое значение, поскольку газовая гангрена требует немедленной хирургической обработки и антибактериальной терапии.