2) выдают ответ об обнаружении коагулазоотрицательного стафилококка
3) повторяют тест с удвоенным количеством стафилококка
4) повторяют тест с плазмой человека
Отрицательный результат реакции плазмокоагулазы через 4–6 часов не всегда является окончательным. При постановке пробирочного теста выявляется свободная коагулаза, секретируемая бактериями в плазму; фермент активирует плазменный фактор, превращающий фибриноген в фибрин, вследствие чего образуется плотный сгусток. У некоторых штаммов реакция развивается медленно, поэтому отсутствие сгустка на раннем сроке требует дальнейшего наблюдения.
В соответствии с регламентом данной методики пробирки с отрицательной реакцией оставляют до 24 часов для окончательного учета. Положительным считают образование устойчивого сгустка или геля, сохраняющегося при осторожном наклоне пробирки. Только после завершения предусмотренного времени инкубации отрицательный результат может быть использован как один из признаков принадлежности изолята к коагулазоотрицательным стафилококкам.
Выдача заключения о коагулазоотрицательном стафилококке уже через 4–6 часов преждевременна, поскольку возможна поздняя продукция коагулазы. Увеличение количества бактериальной массы не относится к стандартной процедуре и может нарушить соотношение реагентов, а использование человеческой плазмы не является необходимым: применяют стандартизованную плазму, обычно кроличью, с известными характеристиками и контролями.
| Параметр | Пробирочный тест | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Определяемый фактор | Свободная, или экстраклеточная, коагулаза | Характерна прежде всего для Staphylococcus aureus |
| Механизм реакции | Образование комплекса коагулаза–фактор плазмы с последующим превращением фибриногена в фибрин | Формирование сгустка плазмы |
| Положительный результат | Плотный сгусток или гель, не растекающийся при наклоне пробирки | Подтверждает наличие плазмокоагулазной активности |
| Отрицательный результат через 4–6 часов | Сгусток отсутствует на промежуточном этапе наблюдения | Не является окончательным; возможна поздняя реакция |
| Окончательный учет | Повторная оценка после выдерживания до 24 часов согласно методике | Позволяет выявить штаммы с замедленной продукцией коагулазы |
| Коагулазоотрицательные стафилококки | Реакция остается отрицательной после полного срока учета | Результат интерпретируют совместно с морфологией, окраской, каталазным тестом и другими идентификационными признаками |
| Стандартизация исследования | Используют регламентированную плазму, стандартный инокулюм и контрольные штаммы | Снижает риск ложных результатов; замена плазмы или произвольное увеличение инокулюма не рекомендуется |
Таким образом, ранняя отрицательная реакция отражает только промежуточный этап исследования. Окончательное заключение делают после полного времени наблюдения, установленного методикой. Диагноз коагулазонегативного стафилококка не основывается на одном раннем тесте и требует подтверждения совокупностью культуральных и биохимических признаков. При получении сомнительного результата исследование проводят с соблюдением контроля качества и стандартных условий постановки.