2) солянокислый спирт 3%
3) перманганат калия
4) смесь Никифорова
Реакция иммунофлуоресценции (РИФ) основана на специфическом связывании антител, конъюгированных с флюорохромом, с антигенами микроорганизма в исследуемом мазке. После инкубации препарата избыток несвязавшегося конъюгата удаляют промыванием дистиллированной водой. Это снижает неспецифическое свечение фона и повышает контраст специфической флюоресценции, по которой выявляют антиген.
В классической учебной схеме РИФ дистиллированная вода используется именно как промывающая среда после нанесения меченых антител. Солянокислый спирт является дифференцирующим и обесцвечивающим реагентом, перманганат калия обладает окислительными свойствами, а смесь Никифорова применяется преимущественно для фиксации и обезвоживания материала. В современных лабораторных протоколах для промывания также могут применяться фосфатно-солевые буферы, однако в представленном варианте правильным ответом является дистиллированная вода.
| Этап или реагент | Назначение | Значение для РИФ |
|---|---|---|
| Фиксация мазка | Закрепление клеток и антигенов на предметном стекле | Предотвращает смывание материала при последующей обработке |
| Меченые антитела | Специфическое связывание с антигеном микроорганизма | Формируют комплекс, выявляемый по свечению флюорохрома |
| Дистиллированная вода | Удаление несвязавшегося конъюгата | Используется для промывания препарата после инкубации с мечеными антителами |
| Солянокислый спирт 3% | Дифференциация и обесцвечивание при специальных методах окраски | Не применяется как стандартный промывающий раствор в РИФ |
| Перманганат калия | Окислительная обработка или вспомогательное окрашивание | Не предназначен для удаления свободного флюорохромного конъюгата |
| Смесь Никифорова | Фиксация и обезвоживание исследуемого материала | Применяется до иммунологической реакции, а не для промывания после неё |
| Положительный результат | Специфическое яркое свечение соответствующей формы и локализации | Свидетельствует о наличии искомого антигена при правильном контроле реакции |
Качество промывания непосредственно влияет на специфичность РИФ: недостаточное удаление свободного конъюгата повышает фоновое свечение и может привести к ложноположительной оценке. После промывания препарат высушивают и исследуют во флуоресцентном микроскопе с использованием соответствующего светофильтра. Интерпретацию проводят с учетом отрицательного и положительного контролей, поскольку слабое неспецифическое свечение само по себе не подтверждает наличие возбудителя.