2) 2-4
3) 4-6 (+)
4) 1-2
Правильным является интервал 4–6 часов. Метод подращивания используют для быстрого увеличения концентрации в исследуемом материале вегетативных форм анаэробных клостридий — прежде всего возбудителей клостридиального мионекроза. Биоматериал из глубины поражённых тканей или раневой экссудат инкубируют в восстановительных питательных средах: мясном либо печёночном бульоне с цистеином, лакмусовом молоке с цистеином или тиогликолевой среде. Температура 42 °C и анаэробные условия ускоряют накопление клостридий, поэтому через 4–6 часов их количество обычно становится достаточным для ориентировочной микроскопической оценки.
Предварительный результат основывается на обнаружении крупных грамположительных палочек, нередко располагающихся попарно или короткими цепочками; в зависимости от вида могут выявляться споры и капсулы. Для Clostridium perfringens характерны массивные палочки с обрубленными концами, редкое образование спор в патологическом материале и выраженная токсинопродукция, вызывающая некроз мышц, гемолиз, отёк и газообразование. Интервал менее 4 часов часто недостаточен для накопления диагностически значимого количества микроорганизмов, а ожидание более 6 часов уменьшает преимущество ускоренного исследования.
Результат подращивания считается ориентировочным и не заменяет полноценного бактериологического исследования. Окончательное заключение получают после анаэробного выделения чистой культуры, оценки морфологических, биохимических и токсигенных свойств, а при наличии соответствующего оснащения — с помощью MALDI-TOF масс-спектрометрии или молекулярно-генетических методов.
| Метод или признак | Диагностическое значение | Ориентировочный срок |
|---|---|---|
| Прямая микроскопия материала | Выявление крупных грамположительных палочек при небольшом количестве лейкоцитов поддерживает диагноз клостридиального мионекроза | 30–60 минут |
| Ускоренное подращивание при 42 °C | Повышает концентрацию жизнеспособных клостридий в восстановительной жидкой среде | 4–6 часов |
| Посев в анаэробных условиях | Позволяет выделить чистую культуру и подтвердить этиологическую роль микроорганизма | 24–48 часов и более |
| Реакция на лецитиназу | Опалесценция на желточных средах характерна для лецитиназоположительных штаммов, особенно C. perfringens | После появления роста |
| Биохимическая идентификация | Дифференцирует виды клостридий по ферментации углеводов, протеолизу, подвижности и другим свойствам | Обычно 1–3 суток |
| MALDI-TOF или ПЦР | Обеспечивает быстрое видовое подтверждение и, при целевом исследовании, обнаружение генов токсинов | Несколько часов после подготовки материала |
| Отличие от неклостридиальной инфекции | При смешанной аэробно-анаэробной инфекции чаще выявляется полиморфная микрофлора и выраженная лейкоцитарная реакция | Комплексная оценка |
Наиболее информативен материал, полученный из глубины некротизированной мышцы до начала антибактериальной терапии; поверхностные мазки могут отражать лишь вторичную контаминацию раны. Отрицательная микроскопия или культура не исключает заболевание после введения антибиотиков либо при нарушении условий анаэробной транспортировки. Клостридиальный мионекроз является неотложным состоянием, поэтому при характерной клинической картине хирургическую обработку, интенсивную терапию и антибактериальное лечение начинают, не дожидаясь окончательной идентификации возбудителя. Лабораторное исследование уточняет этиологию, но не должно задерживать лечебные мероприятия.