2) гемолитическую активность V.cholerae О139
3) гемолитическую активность V.cholerae О1
4) термостабильный гемолизин V. parahaemolyticus (+)
Реакция Канагава предназначена для выявления термостабильного прямого гемолизина (TDH, thermostable direct hemolysin) у Vibrio parahaemolyticus. Исследование проводят на агаре Вацацуги (Wagatsuma agar), содержащем эритроциты; продукция TDH вызывает повреждение мембран эритроцитов и формирование зоны β-гемолиза. Ген tdh, кодирующий этот порообразующий токсин, чаще обнаруживается у клинически значимых штаммов и связан с их энтеропатогенностью.
Термостабильность гемолизина сохраняется после стандартной термической обработки, поэтому данный признак отличает его от термолабильных гемолизинов. Гемолитическая активность холерных вибрионов серогрупп O1 и O139 не является объектом реакции Канагава: принадлежность к этим серогруппам устанавливают серологически, а их вирулентность прежде всего связывают с холерным токсином и токсин-регулируемыми факторами колонизации.
| Признак | Характеристика | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Микроорганизм-мишень | Vibrio parahaemolyticus | Позволяет оценить потенциальную вирулентность выделенного штамма |
| Основной фактор | Термостабильный прямой гемолизин TDH, продукт гена tdh | Порообразующий токсин, нарушающий целостность мембран клеток |
| Питательная среда | Агар Вацацуги с эритроцитами и повышенной концентрацией соли | Высокая солёность соответствует галофильным свойствам вибриона |
| Положительная реакция | Прозрачная зона β-гемолиза вокруг колоний | Свидетельствует о продукции функционально активного TDH |
| Клиническая связь | Штаммы, вызывающие гастроэнтерит, диарею, абдоминальную боль и рвоту | Положительный результат повышает вероятность клинической значимости изолята |
| Ограничения метода | Отрицательная реакция не исключает патогенность; возможна продукция термостабильного гемолизина TRH | При необходимости применяют ПЦР для выявления tdh и trh, а также подтверждают видовую идентификацию |
Реакция Канагава является фенотипическим тестом, а не самостоятельным методом видовой идентификации вибриона. Ее результаты интерпретируют вместе с биохимическими признаками, солеустойчивостью, MALDI-TOF масс-спектрометрией или молекулярными методами. Положительная реакция указывает на наличие гемолитического фактора, но выраженность гемолиза может зависеть от условий культивирования и свойств эритроцитов. Поэтому в современной диагностике фенотипический результат при необходимости подтверждают обнаружением генов вирулентности.